茜素红 S的染色步骤和注意事项

茜素红 S（Alizarin Red S）是一种常用的染色方法，实质是一种蒽醌衍生物，常用来体外检测组织切片或者培养细胞的钙质变化。机体内的钙，一方面构成骨骼和牙齿，另一方面则可参与各种生理功能和代谢过程，影响各个器官组织的活动。茜素红的作用机制在于它能与碳酸钙或磷酸钙中的钙盐螯合形成橙红色复合物。

茜素红 S染色实例

在干细胞分化为成骨细胞的过程中，细胞表面会沉积钙盐，形成钙结节。通过使用茜素红S染色，可以染出这些钙结节，从而判断干细胞是否成功分化为成骨细胞。

一、茜素红S染色的操作步骤

1、吸去培养基并洗涤：在成骨诱导分化结束后，吸去六孔板中的成骨诱导分化完全培养基，然后使用1×PBS轻柔洗涤2~3次。这样可以去除培养基中的成分，为后续的固定和染色做准备。

2、固定：每孔加入2mL 4%多聚甲醛溶液（或10%福尔马林），在室温下固定30分钟。多聚甲醛或福尔马林是常用的组织固定剂，可以固定细胞和细胞内的成分，以保持其形态和结构。3、洗涤：吸去固定液后，使用1×PBS轻柔洗涤2~3次，确保将固定液彻底清洗掉。这样可以去除多余的固定剂，以避免对后续染色结果的干扰。4、染色：每孔加入2mL茜素红工作液，室温下染色5~10分钟。茜素红是一种常用的染色剂，可用于染色成骨组织或钙化区域。5、洗涤：吸去茜素红染色液后，使用1×PBS轻柔洗涤2~3次，充分洗去多余的染色液。这样可以去除多余的染色剂，以获得清晰的染色结果。6、观察：每孔加入2mL 1×PBS，将培养板置于显微镜下观察成骨染色效果。通过观察染色结果，可以评估成骨组织的形态和钙化区域的分布。7、封装和保存：染色后的六孔板用封口膜封装，然后置于4℃保存，可保存2周。这样可以保持染色结果的稳定性和保存样本的完整性。

二、注意事项

1、钙结节脱落的防止：为了防止钙结节在染色过程中脱落，所有操作应尽可能轻缓。避免强烈的振荡或冲洗，以减少钙结节的损失。

2、茜素红S恢复至室温：在使用茜素红之前，应将其恢复至室温。这样可以确保茜素红的稳定性和染色效果。

3、染色时间的判断：不能仅仅以诱导时间来决定染色时间，而应以显微镜下可见的聚集的钙结节为准。每个样本可能具有不同的钙沉积程度，因此需要根据实际观察来确定染色时间。

4、控制染色时间：一般情况下，茜素红S染色的时间控制在5分钟左右。如果染色效果较浅，可以适当延长染色时间，但需注意不要过度染色。

参考文献

[1]茜素红染色技术应用于川西北中二叠统栖霞组豹斑灰岩流体包裹体测温研究 [J] . 兰叶芳 ,黄思静 ,袁桃 . 岩矿测试 . 2015,第001期

[2]茜素红与阿利新蓝双染色法对小鼠下颌骨发育的整体观察 [J] . 赵一松 ,钟慧敏 ,何志伟 . 口腔医学研究 . 2015,第1期

[3]Comparing Micro-CT Imaging and Alizarin Red Staining Methods to Examine Fetal Rabbit Skeletons (Dutch Belted) Obtained on Day 29 of Gestation [J] . Solomon H. M., Murzyn S., Skedzielewski T., Birth defects research, Part A. Clinical and molecular teratology . 2016,第5期