兔下丘脑神经元细胞的应用

背景^[1-3]

兔下丘脑神经元细胞是一种哺乳动物神经元细胞，通常用于研究神经系统的结构和功能。这种细胞具有长突起，由细胞体和细胞突起构成，具有传导兴奋和信息处理的功能。

兔下丘脑神经元细胞是一种神经元，位于下丘脑的神经元网络中。它们与其他神经元一起构成了下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)，该轴对身体的应激反应和代谢调节起着重要作用。

兔下丘脑神经元细胞通常具有长而细的轴突，这些轴突延伸到垂体前叶并释放促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)。CRH刺激垂体前叶分泌促肾上腺皮质激素(ACTH)，进而刺激肾上腺皮质分泌皮质醇等激素。这些激素可以调节身体的应激反应、免疫系统和代谢功能。

除了HPA轴外，兔下丘脑神经元细胞还与其他神经元相互作用，参与调节食欲、性行为、体温和睡眠等生理过程。例如，它们可以与下丘脑内的食欲调节中枢相互作用，控制食欲和能量代谢；也可以与下丘脑内的性行为中枢相互作用，调节性行为和生殖功能。

与大鼠下丘脑神经元细胞类似，兔下丘脑神经元细胞的生长和存活需要适宜的条件，包括适宜的温度、湿度、营养物质和生长因子等。此外，细胞的来源和物种背景也会影响其生长和存活。

兔下丘脑神经元细胞在科研中常被用于探讨神经调节、内分泌调节和行为学等方面的问题。例如，可以研究下丘脑如何调节体温、血糖、心血管功能等，以及在情绪和行为中的作用。

兔下丘脑神经元细胞

兔下丘脑神经元细胞培养操作

1)复苏兔下丘脑神经元细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)兔下丘脑神经元细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)兔下丘脑神经元细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

兔下丘脑神经元细胞可以用于瘦素对长时间培养的下丘脑神经元细胞内钙信号的调节及机制研究

培养时间对兔下丘脑神经元细胞内钙信号的影响

目的:衰老会引起细胞内静息钙离子浓度的升高,更能够引起细胞对各种损伤因素所导致的钙超载的处理能力下降。而在衰老的神经-内分泌学说中,认为下丘脑是衰老的起步点。长时间培养的细胞在一定程度上能够反映在体细胞的衰老、退化过程。因此,本实验选用原代培养不同时间的兔下丘脑神经元细胞作为研究对象,采用高浓度的KCl处理神经元造成细胞内钙超载,观察培养时间对下丘脑神经元细胞内钙信号的影响。

方法:采用荧光钙离子成像和膜片钳技术,对四个培养时间段的兔下丘脑神经元细胞分别进行以下研究:(1)细胞内钙离子水平记录,采用25 mM KCl处理下丘脑神经元,探讨培养时间对细胞处理钙超载能力的影响,观察钙离子浓度升高的幅度与恢复到基础水平的过程。(2)采用全细胞膜片钳记录,观察培养时间对电压依赖性钙通道功能的影响。

结果:(1)对于不同培养时间的兔下丘脑神经元细胞,分别给予25 mM KCl所引起的细胞内静息钙离子浓度升高的幅度相似,但随后的恢复过程存在很大差异。随培养时间的延长,钙离子恢复的速度和幅度均明显降低。

(2)膜片钳实验中,随着培养时间的延长,电压依赖性钙通道所介导的电流的幅值,膜电容的大小均升高,给予nifedipine后发现,其中L-型钙通道所占的比率随着培养时间的延长明显增加。结论:下丘脑神经元内,钙稳态调节机制的损害与培养时间存在相关性,与培养早期的神经元相比,培养中晚期的神经元排出细胞内过多的钙离子所需的时间更长。而胞膜L-型钙通道电流的增加参与了钙稳态调节机制的异常。

参考文献

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