液化沙雷菌PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

液化沙雷菌PCR试剂盒是一种专门用于检测液化沙雷菌的生物试剂盒。液化沙雷菌是一种重要的医学病原菌，常引起感染性腹泻等疾病。使用PCR试剂盒可以快速、准确地检测出液化沙雷菌，对于感染控制和疾病诊断具有重要意义。

液化沙雷菌PCR试剂盒通常由一对特异性引物、Taq DNA聚合酶、dNTPs等成分组成。通过PCR反应，可以特异性地扩增液化沙雷菌的DNA片段，从而对其进行快速检测。使用这种试剂盒的操作过程相对简单，只需将样品DNA加入到PCR反应液中，经过一系列温度变化和反应后，即可得到检测结果。

液化沙雷菌PCR试剂盒

液化沙雷菌PCR试剂盒具有高灵敏度、特异性强、操作简便等优点，适用于临床诊断、食品检测、环境监测等领域。然而，需要注意的是，PCR技术虽然具有高灵敏度和特异性，但也可能受到其他因素的干扰，如DNA提取效率、引物设计等。因此，在使用PCR试剂盒时，需要严格按照操作说明进行，并对结果进行仔细的分析和解释。

液化沙雷菌PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在液化沙雷菌的感染。

应用^[4-5]

液化沙雷菌PCR试剂盒可以用于肠杆菌科产β-内酰胺酶耐药菌耐药性及其所致感染性疾病研究

研究大理地区肠杆菌科产β-内酰胺酶细菌耐药性及其所致感染性疾病以及blαTEM-lD型耐药基因流行情况,指导临床应用抗生素。

方法：(1)肠杆菌科产β-内酰胺酶耐药菌种收集、鉴定及产酶株的定性检测：从大理学院附属医院、大理州医院、大理市第一医院选取临床分离的肠杆菌科产β-内酰胺酶耐药菌(至少对1种β-内酰胺类抗生素耐药),用全自动微生物鉴定仪(VITEK)鉴定到种。然后用头孢哨噻吩滤纸片法(nitrocefin test)对每株细菌检测是否为产β-内酰胺酶菌株。每株菌试验以后转种于盛有羊血的2ml EP管中孵育16～20小时后置于-70℃冰箱保存备用。

(2) 抗菌药物敏感性试验：用MIC法(微量稀释法)对耐药菌选用8种β-内酰胺类抗生素进行药敏试验,统计多重耐药情况、各种抗生素的耐药率及何种菌株为主。

(3)使用液化沙雷菌PCR试剂盒blαTEM-lD耐药基因检测(PCR法)：提取耐药菌株中的质粒DNA,设计好引物,扩增目标DNA,用琼脂糖电泳,用Mark标记量出扩增子的大小(bp的长度),标准PCR扩增再用琼脂糖电泳分析扩增子的大小,以检测是否含有blαTEM-lD耐药基因。并统计blαTEM-lD耐药基因的比率。所致感染性疾病：查阅临床病历资料,进行回顾性分析标本来源、细菌与临床疾病的关系。

结果与结论：(1)本组试验肠杆菌科细菌有埃希菌属64株(全为大肠埃希菌)、克雷伯菌属41株(肺克39株、产酸克2株),肠杆菌属16株(聚团肠4株、产气肠1株),沙雷菌属8株(液化沙7株、粘质沙1株),沙门菌属3株(甲型副伤寒杆菌2株、伤寒杆菌1株),志贺菌属2株(福氏志贺菌2株),变形杆菌属1株(奇异变形杆菌1株),摩根菌属1株(摩氏摩根菌1株),耶尔森菌属1株(结肠耶尔森氏菌1株)。9个菌属、14个菌种,共137株。缺乏枸橼酸杆菌属标本。大肠埃希菌分离率最高,其次是克雷伯菌。

(2)本组液化沙雷菌PCR试剂盒试验blaTEM-1D型耐药基因阳性62株,比率为45.3%(62/137)。其中大肠埃希菌31株,比率为22.7%(31/137)；肺炎克雷伯菌18株,比率为13.2%(18/137)。其它较少。blαTEM-lD型耐药基因在本地区各家医院间存在水平传播和医院内垂直传播。

参考文献

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[5]周东辉.肠杆菌科产β-内酰胺酶耐药菌耐药性及其所致感染性疾病研究[D].大理学院,2012.