犬诺瓦克病毒PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

犬诺瓦克病毒PCR试剂盒是一种以探针法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测犬诺瓦克病毒的试剂盒。犬诺瓦克病毒PCR试剂盒是一种用于检测犬诺瓦克病毒的PCR试剂盒。犬诺瓦克病毒是一种常见的病毒，可以引起犬只的呼吸道、肠道和泌尿生殖道感染。

犬诺瓦克病毒PCR试剂盒通过PCR技术检测犬诺瓦克病毒的DNA，可以快速、准确地诊断犬诺瓦克病毒感染。在使用该试剂盒时，需要从患者的样本(如粪便、血液、呼吸道分泌物等)中提取DNA，然后进行PCR扩增和检测。如果检测结果为阳性，则说明患者可能感染了犬诺瓦克病毒。

犬诺瓦克病毒PCR试剂盒

犬诺瓦克病毒PCR试剂盒特点：

即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。

引物和探针经过优化，灵敏性高。

提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

特异性高，引物是根据犬诺瓦克病毒高度保守区设计的。

犬诺瓦克病毒PCR试剂盒使用方法：

准备样品：收集犬的肠道或粪便样品，用生理盐水或磷酸盐缓冲液进行悬浮，并使用无菌棉签进行轻微搅拌。

DNA提取：使用试剂盒提供的DNA提取试剂，按照说明书上的操作步骤提取样品中的DNA。

反应设置：根据试剂盒说明书上的操作指南设置PCR反应体系，包括DNA模板、引物、探针、酶和反应缓冲液等。

PCR反应：按照说明书上的操作步骤进行PCR反应，一般包括变性、退火、延伸等步骤。

结果分析：根据PCR反应后的荧光信号强度和扩增曲线，可以判断样品中是否含有犬诺瓦克病毒。

应用^[4-5]

犬诺瓦克病毒PCR试剂盒可以用于RT-PCR检测实验小鼠自然和实验感染鼠诺瓦克病毒及病毒分离

诺瓦克病毒(Noroviruses,NVs)又称诺如病毒或小圆结构病毒(Small round structured virus),是1972年在美国首次发现的新生病毒,直到1995年国内才有报道。NVs是一组世界范围内引起的急性无菌性胃肠炎的重要病原,在全球感染人的非细菌性胃肠炎疾病的病例中超过90%是由该病毒引起的。该病毒是严重危害人类健康的重要食源性病毒,可导致不同年龄阶段人群的急性病毒性腹泻。被NVs感染的食品、水源和NVs感染者排泄物引起的粪口传播是造成NVs感染的主要途径,特点是发病率高、致病剂量低和对外界的抵抗力较强。

从上海地区的实验小鼠中采集小鼠粪便或者盲肠内容物进行RT-PCR检测,并在RAW264.7细胞上生长分离得到MNV病毒。

1. 为了解实验小鼠自然感染MNV的情况,采集送检的80只实验小鼠的粪便样本,应用犬诺瓦克病毒PCR试剂盒RT-PCR方法扩增粪便样本的MNV ORF2特异性基因(187bp,MNV nt5473-5659)片段。对PCR检测为阳性的粪便样本经过10倍体积的PBS稀释以后灌胃到4只ICR小鼠体内,一周以后,将3只ICR小鼠与灌胃的小鼠同居饲养,观察小鼠是否出现异常症状,定期采集粪便做RT-PCR检测,研究小鼠实验感染MNV的情况。一个月以后,处死小鼠,采集粪便、盲肠、十二指肠、脾、肝、大脑、肾、肺、心脏、胸腺、子宫、卵巢和唾液腺等器官做RT-PCR检测,研究MNV的主要感染部位。

结果表明：自然感染的阳性率为13.75%(11/80)；实验感染的小鼠外表健康、活泼、没有腹泻现象,阳性率为100%；主要的感染部位为小鼠的消化系统。本研究是首次在上海地区实验小鼠粪便犬诺瓦克病毒PCR试剂盒检测到MNV。

2.RAW264.7细胞以5×106细胞/平板的密度培养在60mm的平板上,CO2孵化箱培养24个小时,直到形成80%～90%的单层细胞。将培养液倒掉,500μLPCR阳性结果的粪便悬液接种到RAW264.7单层细胞上。CO2孵化箱培养1个小时后,用无血清的培养基洗脱两次,加10mL含5%的胎牛血清,培养48小时,使用Leica DMI3000显微镜拍照,观察细胞的病变效应。将平板保存在-80℃冻存,24小时后,平板置于室温融解,经过三次冻融以后,3000r/min离心5min,去除细胞碎片,上清液用于提取MNV的RNA,反转录成cDNA,进行犬诺瓦克病毒PCR试剂盒PCR。结果表明：目的条带为187bp,与预期的相符。本研究成功的分离培养了MNV病毒。

参考文献

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