EL4小鼠淋巴瘤细胞的应用

背景^[1-3]

EL4小鼠淋巴瘤细胞是一种用于研究的小鼠淋巴瘤细胞系。这种细胞系是通过将小鼠的淋巴瘤组织进行体外培养而建立的。EL4细胞系被广泛用于研究肿瘤免疫学、抗肿瘤药物筛选、疫苗研发等领域。

EL4细胞系的生长特性是悬浮生长，即细胞在培养液中自由漂浮。这种细胞系的形态学表现为淋巴瘤细胞样，具有圆形或椭圆形细胞核和胞质。EL4细胞系的应用主要集中在科研领域，研究人员可以利用这种细胞系来研究肿瘤的发生发展、免疫应答机制以及抗肿瘤药物的筛选和评价等。

EL4小鼠淋巴瘤细胞是一种来源于小鼠淋巴瘤(lymphoma of mice)的细胞系。这种细胞系通常用于研究淋巴瘤的生物学特性、药物筛选和治疗方案开发等方面。

EL4细胞系具有以下特点：

来源：EL4细胞系来源于一只C57BL/6小鼠的淋巴瘤组织。

形态特征：EL4细胞呈圆形或椭圆形，具有多个核和核分裂像。

生长特性：EL4细胞在体外培养条件下生长迅速，具有良好的增殖能力。

分子特征：EL4细胞表达多种淋巴瘤相关的分子标志物，如CD19、CD20等。

药物敏感性：EL4细胞对多种化疗药物具有敏感性，如环磷酰胺、多柔比星等。

基因突变：EL4细胞中存在多个与淋巴瘤发生相关的基因突变，如Myc、Bcl-2等。

EL4小鼠淋巴瘤细胞系为淋巴瘤的研究提供了一个重要的实验模型，有助于深入了解该疾病的发病机制、寻找新的治疗方法和药物筛选。

EL4小鼠淋巴瘤细胞

EL4小鼠淋巴瘤细胞系细胞培养操作

1)复苏EL4小鼠淋巴瘤细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)EL4小鼠淋巴瘤细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)EL4小鼠淋巴瘤细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

EL4小鼠淋巴瘤细胞系可以用于MCMV诱导鼠T细胞淋巴瘤EL4细胞凋亡及其作用机制

T细胞淋巴瘤是一种来源于T细胞的恶性增殖性疾病。2008年WHO淋巴瘤新分类标准中T细胞部分包括T-淋巴母细胞白血病/淋巴瘤和成熟T/NK细胞淋巴瘤两大类,后者又包括结外NK/T细胞淋巴瘤,外周T细胞淋巴瘤,成人T细胞白血病/淋巴瘤等多个类型。

通过观察鼠T细胞淋巴瘤细胞株EL4细胞能否被小鼠巨细胞病毒(Murine cytomegalovirus,MCMV)感染,及其感染前后EL4小鼠淋巴瘤细胞系形态的变化,及MCMV感染对EL4细胞凋亡的影响,为寻求有效的T细胞淋巴瘤治疗方法提供新的方向。

方法：设立正常对照组、MOI=1感染组、MOI=10感染组、MOI=100感染组,另外设有更昔洛韦(ganciclovir,GCV,GCV 25μg/ml)组、MCMV(MOI=60)组、MCMV+GCV(MOI=60,GCV 25μg/ml)组。分别以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1、10、100的MCMV smith株感染EL4细胞,于感染后1、3和5天收集细胞。瑞氏-吉姆萨染色后光镜下观察细胞形态;台盼蓝抗染法计数细胞存活率;实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测感染细胞内MCMV DNA基因拷贝数;流式细胞技术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测感染细胞P53、P21、cFlip、Caspase8的mRNA表达水平;Wetern blot检测Caspase8、P53、Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase3的蛋白表达水平。

结果：MCMV感染后,EL4小鼠淋巴瘤细胞系体积增大,细胞核不规则,见折基金项目:国家自然科学基金,81470344叠扭曲。与正常对照组相比,各感染组EL4小鼠淋巴瘤细胞系存活率降低,凋亡率增加(P<0.05),凋亡蛋白P53、Bax/Bcl-2、Cleaved-caspase3、Caspase8表达均上调,以MOI=10感染组在感染后第5天最为明显。与MCMV感染组(MOI=60)比较,MCMV+GGV组EL4细胞内MCMV DNA含量降低(P<0.05),EL4细胞凋亡率及凋亡蛋白P53、Caspase8、Bax/bcl-2表达降低(P<0.05)。

结论：鼠T细胞淋巴瘤细胞株EL4细胞可被MCMV感染,呈现出明显凋亡现象。EL4小鼠淋巴瘤细胞系在MCMV感染后凋亡蛋白P53、Bax/Bcl-2、Cleaved-caspase3、Caspase8表达上调。更昔洛韦抑制EL4细胞内MCMV DNA复制,减弱MCMV对EL4细胞的杀伤作用。

参考文献

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[5]张在利.MCMV诱导鼠T细胞淋巴瘤EL4细胞凋亡及其作用机制[D].重庆医科大学,2019.