HIEC-6 正常人肠上皮细胞系的应用

背景^[1-3]

HIEC-6正常人肠上皮细胞系是一种正常人肠上皮细胞系，通常用于研究肠道生理和病理过程。这种细胞系具有正常的染色体数和稳定的遗传学特性，能够模拟人体肠道上皮细胞的结构和功能。

HIEC-6正常人肠上皮细胞系通常用于研究肠道微生物组、肠道免疫系统、肠道神经系统、肠道细胞因子、肠道营养物质吸收和肠道疾病等方面的实验。这些研究有助于深入了解肠道生理和病理过程，为临床诊断和治疗提供重要的参考依据。

HIEC-6正常人肠上皮细胞系是一种来源于人类结肠的正常肠上皮细胞系。该细胞系具有以下特点：

来源于人类结肠：HIEC-6正常人肠上皮细胞系是从人类结肠中分离出来的，因此具有与人类肠道上皮细胞相似的形态和生理特性。

正常细胞系：HIEC-6细胞系在正常情况下不会发生癌变，因此可以作为研究人类肠道生理和病理过程的理想模型。

可传代性好：HIEC-6细胞系具有较高的传代稳定性，可以在体外连续培养和扩增。

可诱导分化：HIEC-6细胞系可以被诱导分化为多种不同类型的细胞，如杯状细胞、柱状细胞等，这为研究肠道上皮细胞的分化和功能提供了便利。

HIEC-6细胞系已经被广泛应用于肠道疾病的研究，如炎症性肠病、肠道肿瘤等。同时，它也可以作为药物筛选和毒性评价的模型，以及用于开发新型药物和治疗方法。

HIEC-6正常人肠上皮细胞系

HIEC-6正常人肠上皮细胞系细胞培养操作

1)复苏HIEC-6正常人肠上皮细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)HIEC-6正常人肠上皮细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)HIEC-6正常人肠上皮细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

HIEC-6正常人肠上皮细胞系可以用于ERGIC1基因在结直肠癌增殖侵袭中的作用及临床相关性研究

通过体外实验检测ERGIC1基因在结直肠癌和癌旁组织中的表达差异;通过细胞实验探究ERGIC1在人CRC细胞系和HIEC-6正常人肠上皮细胞系中的表达以及过表达ERGIC1后对人CRC细胞恶性生物学行为的影响,为探讨ERGIC1基因能否作为结直肠癌发生发展过程中的关键分子靶标奠定理论基础,有助于揭示结直肠癌增殖及进展的相关生物学机制。

方法:1、临床样本收集:规范化收集实施结直肠癌根治术的40例结直肠癌组织标本为实验组,相应癌旁未受侵组织为对照组。

2、通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)检测ERGIC1基因在结直肠癌和癌旁组织中的表达情况。

3、通过免疫组化(Immunohistochemical,IHC)和免疫荧光染色(Immunofluorescence,IF)检测ERGIC1蛋白在结直肠癌和癌旁组织中的表达差异和具体表达部位。

4、RT-PCR检测ERGIC1在HIEC-6正常人肠上皮细胞系和人CRC细胞系HT-29、HCT116、SW480、SW620中的表达水平,并筛选出表达量最低的CRC细胞系。

5、ERGIC1过表达载体构建:购买ERGIC1基因的c DNA片段,扩增出目的片段,连接到特定的过表达载体上,筛选出阳性克隆进一步扩大培养,提取质粒。提取的质粒转染到SW480细胞系中,过表达24-48h后,收取样品进行RT-PCR检测。

6、流式细胞凋亡实验、细胞划痕实验、CCK8实验、Transwell迁移和侵袭实验验证过表达ERGIC1后对CRC细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭的影响。

结果:1、ERGIC1基因在结直肠癌组织中的表达和临床意义RT-PCR检测结果显示:相比较结直肠癌组织,ERGIC1在癌旁组织中显著高表达,差异有统计学意义(P=0.006)。IF检测结果显示:ERGIC1蛋白在结直肠癌中的细胞定位主要定在胞浆和质膜上。IHC检测结果显示:ERGIC1蛋白在癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P﹤0.01),并且其表达与肿瘤p TNM分期(P=0.014)、淋巴结转移(P=0.047)以及p53突变(P=0.044)显著相关,与性别、年龄、肿瘤大小和神经脉管侵犯无关。通过对患者近期复发转移和死亡的分析发现,ERGIC1低表达者和高表达者其术后短期预后差异无统计学意义(P=0.695)。

2、ERGIC1基因在CRC细胞系和HIEC-6正常人肠上皮细胞系中的表达情况RT-PCR检测结果显示:CRC细胞系HT-29、HCT116、SW480、SW620中ERGIC1的表达量均显著低于正常人肠上皮细胞系HIEC-6(P<0.0001;P<0.001;P<0.0001;P<0.0001),在SW480细胞系中的表达量最低。

参考文献

[1]ERGIC2 and ERGIC3 regulate the ER-to-Golgi transport of gap junction proteins in metazoans.[J].Guan Liying;Yang Yongzhi;Liang Jing Jing;Miao Yue;Shang Ang Yang;Wang Baolei;Wang Ying Chun;Ding Mei.Traffic(Copenhagen,Denmark),2022

[2]Global Cancer Statistics 2020:GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185 Countries[J].Sung Hyuna;Ferlay Jacques;Siegel Rebecca L.;Laversanne Mathieu;Soerjomataram Isabelle;Jemal Ahmedin;Bray Freddie.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2021

[3]Hepatitis B Virus Exploits ERGIC-53 in Conjunction with COPII to Exit Cells[J].Lisa Zeyen;;Tatjana Döring;;Reinhild Prange.Cells,2020

[4]ERGIC3 Silencing Additively Enhances the Growth Inhibition of BFA on Lung Adenocarcinoma Cells.[J].Zhao Qiurong;;Wu Mingsong;;Zheng Xiang;;Yang Lei;;Zhang Zhimin;;Li Xueying;;Chen Jindong.Current cancer drug targets,2020]

[5]朱成章.ERGIC1基因在结直肠癌增殖侵袭中的作用及临床相关性研究[D].甘肃中医药大学,2023.