人肝癌细胞的特性及其用途

人肝癌细胞分离自患有肝癌病人的肝癌组织；肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。

细胞特性

来源：肝癌组织

形态：上皮细胞样，贴壁生长

含量：>1x10^6  细胞数

规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

细胞处理

1） 冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

一种人肝癌细胞系及其用途

本发明要解决的技术问题就是针对现有的人肝癌细胞系存在的生物多样性低，与临床上肝癌的生物学性状相差较大的不足，而提供一种新的人肝癌细胞系及其制备方法和用途。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种人肝癌细胞，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201072。

本发明还提供如上所述的人肝癌细胞的子代细胞。

本发明还提供如上所述的人肝癌细胞的用途，用于在哺乳动物中产生肝癌。所述的哺乳动物可以是各种哺乳动物，优选裸小鼠。所述的裸小鼠优选BALB/c裸小鼠。所述的肝癌优选低分化或中分化肝细胞癌。所述的肝癌是癌细胞基因组中有乙肝病毒DNA整合的肝癌。

本发明还提供一种上述人肝癌细胞系的建立方法，包括以下步骤，

1)获得新鲜的临床肝癌手术切除标本，切成20～50mg的小块，皮下穿刺接种哺乳动物；

2)穿刺接种70～90天后，将荷瘤动物处死，取出肿瘤组织，进行癌细胞的原代培养和传代培养。

其中，所述的哺乳动物、所述的肝癌都如上所述。

所述的新鲜的临床肝癌手术切除标本较佳的用哺乳动物细胞培养液或生理盐水漂洗后再进行接种。较佳的用新鲜的HBSS缓冲液(含500U/ml青霉素G、500μg/ml硫酸链霉素和1.25μg/ml两性霉素B)漂洗。

所述的接种的方式可以是皮下穿刺接种，原位接种或者肾囊膜内接种。对于肝癌较佳的是进行皮下穿刺接种。

所述的原代培养方法可以是常规的哺乳动物细胞的原代培养方法。较佳的包括以下步骤：将肿瘤组织剪切成小块，置入培养瓶中，于37℃孵箱5％CO2条件下培养；次日，将培养瓶慢慢翻转平放，向瓶内加入DMEM/F12培养液(含10ng/ml重组人表皮生长因子，10μg/ml重组人胰岛素，6.7ng/ml亚硒酸钠，5.5μg/ml转铁蛋白，2μg/ml乙醇胺，0.1％牛血清白蛋白，100U/ml青霉素G、100μg/ml硫酸链霉素和0.25μg/ml两性霉素B)，静置培养；

所述的传代培养方法可以是常规哺乳动物细胞的传代培养方法。较佳的包括以下步骤：吸弃旧培养液，向瓶中加入新鲜的0.05％胰蛋白酶溶液，待细胞脱落后，加入新鲜的DMEM/F12培养液，仔细吹打，使之脱离瓶壁形成细胞悬液；少量在瓶壁上变圆但没有脱落的细胞，用无菌细胞刮刀轻轻挂擦培养瓶表面，收集全部细胞，离心，分别接种于新的培养瓶；当细胞传代到第五代以后，将培养液更换为RPMI 1640培养液(含10％胎牛血清，10μg/ml重组人胰岛素，100U/ml青霉素G、100μg/ml硫酸链霉素和0.25μg/ml两性霉素B)。

参考文献

CN102465113A