布氏旋毛虫PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

布氏旋毛虫PCR试剂盒是一种专门用于检测布氏旋毛虫的生物试剂，采用PCR技术进行检测。这种试剂盒具有高灵敏度、特异性强、操作简便等特点，可用于科研实验、临床检测等领域。

使用布氏旋毛虫PCR试剂盒可以快速、准确地检测布氏旋毛虫，对于该虫引起的感染和疾病的诊断和治疗具有重要意义。

布氏旋毛虫PCR试剂盒是一种用于检测布氏旋毛虫DNA的PCR试剂盒。该试剂盒通常包括以下成分：

PCR反应液：包括PCR缓冲液、dNTPs、引物、Taq聚合酶等。

标准品：用于定量检测布氏旋毛虫DNA的浓度。

阴性对照：用于排除假阳性结果的可能性。

阳性对照：用于确认试剂盒的准确性和可靠性。

使用该试剂盒时，首先需要提取样本中的DNA，然后将提取的DNA加入到PCR反应液中进行扩增。通过检测扩增产物的荧光信号强度，可以确定样本中是否存在布氏旋毛虫DNA。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适用于临床诊断和流行病学调查等领域。

布氏旋毛虫PCR试剂盒

布氏旋毛虫PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在布氏旋毛虫的感染。

应用^[4-5]

布氏旋毛虫PCR试剂盒可以用于旋毛虫COXⅠ基因多态性分析和成囊前期幼虫检疫方法的研究

对旋毛虫肌幼虫在不同宿主肌肉中的分布、囊包内幼虫含量以及目前国内外普遍应用的肉类及肉制品中旋毛虫(尤其成囊前期幼虫)检疫方法的敏感性及其影响因素进行了观察。

材料与方法1.旋毛虫与实验动物本实验所用虫种为旋毛虫(T1)、乡土旋毛虫(T2)、布氏旋毛虫(T3)、伪旋毛虫(T4)及纳氏旋毛虫(T7);7个猪源旋毛虫地理株来自河南、湖北、云南、西安、哈尔滨、同江及天津。健康雄性昆明小鼠和Sprague Dawley(SD)大鼠购自河南省实验动物中心。

2. 旋毛虫肌幼虫基因组DNA的提取及布氏旋毛虫PCR试剂盒PCR扩增酚氯仿法提取旋毛虫肌幼虫基因组DNA,使用旋毛虫COXⅠ基因的简并引物:L6625(5’-TTYTGRTTYTTYGGNCAYCC-3’):H7005(5’-ACNACRTARTANGTRTCRTG-3’)。对所提取的旋毛虫肌幼虫基因组DNA进行PCR扩增。

3. PCR-RFLP使用Trull(MseI)限制性内切酶对纯化后的PCR产物进行酶切,3%琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物,用凝胶图像分析仪观察并分析酶切结果。

4. 布氏旋毛虫PCR试剂盒PCR-SSCP将纯化后的PCR产物进行SSCP,8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SSCP结果,电泳后银染显色。通过计算获得等位基因频率、基因型频率以及多态性信息含量。

5. 旋毛虫幼虫在大鼠与小鼠肌肉分布及囊包内幼虫数量的观察将30只昆明小鼠和30只SD大鼠均随机分为轻、中、重度感染组,每组10只,分别按每g体重1、5、20条肌幼虫经口感染。感染后40d剖杀,取不同部位肌肉称重后压片镜检,观察不同部位每g肌肉虫荷(larvae per gram,lpg)及囊包内幼虫数量。

6. ICT-消化法对肉中旋毛虫肌幼虫检测的敏感性观察按每g肌肉1～5条幼虫加入正常猪肉样本中,人工消化后镜检,观察不同虫荷的检出率。

7.成囊前期幼虫(PEL)的检疫3组小鼠分别用20、10及5条幼虫感染,感染后18d剖杀,应用国际旋毛虫病委员会推荐的消化法(ICT-消化法)、我国国家标准-猪旋毛虫病诊断技术GB/T 18642-2002(国标消化法)和贝氏法,对感染后18d的成囊前期幼虫进行检验,比较3种方法的检疫效果。

参考文献

[1]Clonal polymerase chain reaction–single-strand conformational polymorphism analysis:An effective approach for identifying cloned sequences[J].H.Zhou;;J.G.H.Hickford.Analytical Biochemistry,2008(1)

[2]Application of PCR-SSCP for molecular epidemiological studies on the exposure of farm children to bacteria in environmental dust[J].Melanie Korthals;;Markus J.Ege;;Christoph C.Tebbe;;Erika von Mutius;;Johann Bauer.Journal of Microbiological Methods,2008(1)

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[4]PCR–SSCP:A Method for the Molecular Analysis of Genetic Diseases[J].Kakavas V.Konstantinos;;Plageras Panagiotis;;Vlachos T.Antonios;;Papaioannou Agelos;;Noulas V.Argiris.Molecular Biotechnology,2008(2)

[5]姜鹏.旋毛虫COXⅠ基因多态性分析和成囊前期幼虫检疫方法的研究[D].郑州大学,2012.