CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系是一种来源于人类胰腺癌的贴壁细胞系。这种细胞系是通过将胰腺癌组织接种到裸鼠体内，然后从裸鼠体内分离出肿瘤细胞并进行体外培养而建立的。

CAPAN-1细胞系具有以下特点：

贴壁生长：CAPAN-1细胞系在体外培养时，需要贴附在培养皿的底部，形成单层细胞。

高增殖率：CAPAN-1细胞系具有较高的增殖率，可以在短时间内达到较高的细胞密度。

肿瘤特异性：CAPAN-1细胞系来源于人类胰腺癌，因此具有肿瘤特异性，可以用于研究胰腺癌的发生、发展和治疗。

稳定传代：CAPAN-1细胞系可以在体外稳定传代，保持其生物学特性和表型。

CAPAN-1细胞系在胰腺癌研究中具有广泛的应用，如用于研究胰腺癌的发病机制、药物筛选、基因表达分析等。同时，由于其来源于人类胰腺癌，因此在研究过程中可以更好地模拟胰腺癌的生理环境，提高研究的准确性和可靠性。

CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系

CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系细胞培养操作

1)复苏CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系可以用于大蒜素制剂对人胰腺癌细胞Capan-1生长增殖作用的体外实验研究

观察研究大蒜素制剂(Allicin)对体外培养的CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系生长增殖的影响及其对Capan-1细胞周期的作用,以及细胞体外迁移能力的影响,为大蒜素制剂用于临床胰腺癌的治疗提供实验依据。

[方法]：1测定体外培养的CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系的细胞活力、贴壁率,应用四唑盐比色法(MTT)测定Capan-1细胞在不同时间、不同浓度的OD值,绘制生长曲线,确定最佳细胞接种浓度及药物干预区间。

2. 四唑盐比色法(MTT)测定不同浓度,不同作用时间的大蒜素制齐(Allicin)对CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系的生长增殖抑制作用,测定其IC50,并于倒置显微镜下观察细胞形态学变化。

3. 流式细胞术检测大蒜素制剂(Allicin)对CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系细胞周期的影响并分析证实是否有诱导凋亡的作用；细胞划痕实验检测大蒜素制剂(Allicin)对人胰腺癌细胞株Capan-1株迁移能力的影响。

[结果]：1.CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系常规培养,存活率均>95%符合本实验要求,MTT测定的生长曲线提示按照6×103/孔的密度接种于96孔板内可提供足够的细胞生长空间及营养成分,使细胞于接种24小时后,适应新环境,逐渐进入快速繁殖期。

2. 选取6×103/孔浓度CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系接种于96孔板后的24—72小时左右作为药物干预实验区间,该区间能够保证细胞始终处于一个稳定的对数生长期；在此条件下MTT法检测不同浓度大蒜素制剂对Capan-1细胞生长抑制率具有时间和剂量依赖性。

3. 流式细胞术检测结果显示大蒜素制剂可使CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系周期阻滞于G2/M期,抑制细胞有丝分裂的进程,同时可见典型的亚二倍体峰即凋亡峰(AP)出现；TUNEL凋亡实验进一步证实大蒜素制剂能诱导Capan-1细胞凋亡的发生;细胞划痕实验结果显示大蒜素制剂能够明显降低人胰腺癌Capan-1细胞的迁移能力。

[结论l：本实验结果示：1.不同浓度大蒜素制剂(Allicin)作用不同时间对CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系生长增殖具有明显的抑制作用,呈时-效和量-效依赖关系,具有时间依赖性和剂量依赖性。

2. 大蒜素制剂(Allicin)能诱导CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系凋亡,并将细胞周期阻滞于G2/M期,从而抑制细胞的分裂增殖。

3. 大蒜素制剂能够明显降低CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系细胞的迁移能力。

4.大蒜素制剂(Allicin)可能是有前景的抑制胰腺癌细胞的药物。

参考文献

[1]Cancer statistics,2014.Rebecca Siegel;;Jiemin Ma;;Zhaohui Zou;;Ahmedin Jemal.CA A Cancer Journal for Clinicians,2014

[2]Cancer statistics:Current diagnosis and treatment of pancreatic cancer in Shanghai,China.Jiang Long;;Guo-pei Luo;;Zhi-wen Xiao;;Zu-qiang Liu;;Meng Guo;;Liang Liu;;Chen Liu;;Jin Xu;;Yu-tang Gao;;Ying Zheng;;Chunxiao Wu;;Quan-xing Ni;;Min Li;;Xianjun Yu.Cancer Letters,2014

[3]Phase I/II study of albumin-bound nab-paclitaxel plus gemcitabine administered to Chinese patients with advanced pancreatic cancer.Dong-sheng Zhang;;De-shen Wang;;Zhi-qiang Wang;;Feng-hua Wang;;Hui-yan Luo;;Miao-zhen Qiu;;Feng Wang;;Yu-hong Li;;Rui-hua Xu.Cancer Chemotherapy and Pharmacology,2013

[4]The effects of garlic‐derived sulfur compounds on cell proliferation,caspase 3 activity,thiol levels and anaerobic sulfur metabolism in human hepatoblastoma HepG2 cells.Ma?gorzataIciek;IngaKwiecień;Gra?ynaChwatko;MariaSoko?owska‐Je?ewicz;DanutaKowalczyk‐Pachel;HannaRokita.Cell Biochem Funct,2012

[5]吕欣霖.大蒜素制剂对人胰腺癌细胞Capan-1生长增殖作用的体外实验研究[D].昆明医科大学,2016.