AMPPD发光显色试剂盒的应用

背景^[1-3]

AMPPD发光显色试剂盒是一种用于检测AMPPD(2-氨基-4-甲基-5-苯基-1，3-吡啶二酮)的发光显色试剂盒。AMPPD是一种荧光物质，当其与某些化合物反应时，会产生荧光信号。

AMPPD发光显色试剂盒通常包括以下几个主要成分：

AMPPD底物：用于与待测化合物反应产生荧光信号。

荧光检测器：用于检测AMPPD产生的荧光信号。

标准曲线：用于确定AMPPD底物的浓度和荧光信号的关系。

缓冲液：用于调节反应条件，保持试剂盒的稳定性。

AMPPD发光显色试剂盒

AMPPD发光显色试剂盒的操作步骤一般包括以下步骤：

1.临用前，取适量的A1和A2，等量混合后获得Dioxetane Buffer。

2.按2.5mgAMPPD溶于25ml Dioxetane Buffer，配制0.1mg/ml AMPPD底物溶液即为AMPPD Dioxetane Buffer(发色发光显迹液)，用于膜的染色。

3.取适量Dioxetane Buffer洗膜两次，每次15min。

4.对于PVDF膜进行的碱性磷酸酶反应，膜置于新鲜配制的AMPPD Dioxetane Buffer作用5min。

使用AMPPD发光显色试剂盒时，首先需要将待测化合物加入到试剂盒中，然后与AMPPD底物反应。反应结束后，将反应液转移到荧光检测器中进行检测。荧光检测器会根据反应液中的AMPPD底物浓度和荧光信号的关系，计算出待测化合物的浓度。

需要注意的是，AMPPD发光显色试剂盒只能检测AMPPD产生的荧光信号，不能检测其他类型的荧光物质或化合物。此外，使用试剂盒时需要严格遵循操作规程，以确保结果的准确性和可靠性。

应用^[4-5]

AMPPD发光显色试剂盒可以用于基于纳米磁珠与化学发光技术检测广西巴马小型猪PERV的研究

研究利用纳米磁珠(magnetic nanoparticles,MNPs)与AMPPD发光显色试剂盒化学发光(chemiluminescence,CL)技术,建立了一种基于纳米磁珠与化学发光的PERV检测方法,并应用该方法进行了广西巴马小型猪PERV前病毒的检测研究,主要内容包括：

1、纳米磁珠的制备及其在血液DNA提取中的应用采用溶剂热法制备出Fe304纳米磁珠,在其表面进行Si02包覆,得到Fe3O4@SiO2复合磁珠,并进行氨基化及羧基化修饰,获得羧基功能化纳米磁珠(CMNPs)。经透射电子显微镜(TEM)、扫描电子显微镜(SEM)表征,粒径分析,化学基团的傅立叶变换红外光谱(FT-IR)测定,以及振动样品磁强计(VSM)分析得出：该磁珠形貌良好、粒径均匀、磁性好且为超顺磁性。另外,所制备的Fe3O4@SiO2磁珠能够很好地应用于巴马小型猪的血液基因组DNA的提取。

2、基于纳米磁珠与AMPPD发光显色试剂盒化学发光的PERV检测方法的建立与优化利用CMNPs作为固相载体,分别以pol、env-A、env-B与env-C片段为目标分子,经过生物素标记PCR扩增、固相杂交反应、SA-ALP孵育、加入AMPPD发光显色试剂盒AMPPD发光的步骤,建立了一种PERV及PERV-A、PERV-B、PERV-C三种亚型的化学发光检测法。结果表明,该方法特异性强、灵敏度高。经过条件优化得到最优检测体系为：1mM的SA修饰浓度,10μM的探针修饰浓度,55℃(PERV)、54℃(PERV-A)、50℃(PERV-B)、56℃(PERV-C)的杂交温度,30min的杂交时间。

3、广西巴马小型猪PERV相对拷贝数的AMPPD发光显色试剂盒化学发光检测建立了GAPDH化学发光检测法,结合上述建立的PERV及其亚型的化学发光检测法,进行了PERV及其三种亚型前病毒在20头广西巴马小型猪基因组中的相对拷贝数的检测与分析。

结果表明,PERV的相对拷贝数在0.94±0.10至6.79±0.59之间,PERV-A的相对拷贝数在1.01士0.13至7.26±0.64之间,PERV-B的相对拷贝数为0.74±0.08至6.13±0.65之间,PERV-C的相对拷贝数在0.05±0.01至0.44±0.12之间。说明在该20头巴马小型猪的基因组中,PERV前病毒拷贝数各不相同,PERV-C亚型前病毒拷贝数极少。应用上述建立的方法,有助于筛选低拷贝PERV的巴马小型猪,为异种移植提供合适的供体,同时为培育PERV低拷贝猪奠定基础。

参考文献

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[5]杨淏文.基于纳米磁珠与化学发光技术检测广西巴马小型猪PERV的研究[D].广西大学,2015.