CL1-5 人肺腺癌细胞系的应用

背景^[1-3]

CL1-5人肺腺癌细胞系是一种用于研究人肺腺癌的细胞系。这种细胞系是通过将人肺腺癌的肿瘤组织进行体外培养而获得的。

CL1-5人肺腺癌细胞系具有一些独特的生物学特性，例如上皮细胞样形态、贴壁生长等。这种细胞系可以用于研究肺腺癌的生物学特性、药物筛选和化疗药物敏感性等方面的研究。同时，CL1-5人肺腺癌细胞系还可以用于评估治疗效果和开发新的治疗策略。

CL1-5人肺腺癌细胞系是一种来源于人类肺腺癌的贴壁细胞系。这种细胞系通常用于研究肺癌的生物学特性、药物筛选和治疗等。

CL1-5人肺腺癌细胞系具有以下特点：

形态特征：细胞呈多边形或长方形，大小约为10-30微米。

生长特性：CL1-5细胞系在适宜的培养条件下，生长迅速，增殖能力强。

表达特征：CL1-5细胞系表达多种肺癌相关基因和蛋白，如EGFR、KRAS、ALK等。

药物敏感性：CL1-5细胞系对多种抗肿瘤药物敏感，如紫杉醇、顺铂、吉非替尼等。

CL1-5细胞系广泛应用于肺癌研究，包括肺癌的发病机制、诊断和治疗等方面。同时，由于其易于培养和操作，也被广泛应用于基础研究和药物筛选等领域。

CL1-5人肺腺癌细胞系

CL1-5人肺腺癌细胞系细胞培养操作

1)复苏CL1-5人肺腺癌细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)CL1-5人肺腺癌细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)CL1-5人肺腺癌细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

CL1-5人肺腺癌细胞系可以用于低氧肿瘤微环境通过Akt-PDK1-YKL40通路诱导非小细胞肺癌侵袭性生长和血管生成

研究旨在阐明低氧诱导线粒体中Akt2-PDK1通路调控YKL-40在肺癌侵袭性生长和血管新生中的作用,为临床上肺癌的治疗提供新的靶点和思路。

实验方法1、比较强侵袭性CL1-5人肺腺癌细胞系在常氧和低氧环境培养下,线粒体中Akt2和PDK1的富集和磷酸化水平,细胞内HIF-1α,YKL-40,VEGF,TGF-β等蛋白的表达和分泌。

2、构建Akt2 sh RNA、YKL-40过表达慢病毒载体,转染CL1-5人肺腺癌细胞系,比较Akt2干扰和/或YKL-40过表达对CL1-5细胞中PDK1磷酸化,YKL-40,VEGF,TGF-β等蛋白的表达和分泌的影响;通过CCK8,Transwell实验和成管能力检测等方法检测细胞活性、迁移、侵袭和血管新生能力。

3、将上述处理细胞系分别构建裸鼠皮下荷瘤模型,观察Akt2干扰和/或YKL-40过表达的CL1-5人肺腺癌细胞系细胞的成瘤能力。

4、在第32天收集各组肿瘤组织,通过免疫印迹检测小鼠肿瘤中Akt2和PDK1的富集和磷酸化水平,YKL-40,VEGF,TGF-β等蛋白的表达,通过免疫组化比较各组肿瘤细胞的增殖活性和血管生成能力。

实验结果1、低氧处理CL1-5人肺腺癌细胞系细胞能明显增加线粒体中Akt2、PDK1的磷酸化水平,细胞内p-Smad3、YKL-40和HIF-1α蛋白表达增加,细胞TGF-β、YKL-40、VEGF的分泌增加。

2、CL1-5人肺腺癌细胞系细胞转染Akt2 sh RNA载体,并在低氧环境下处理24 h,Akt2、p-Akt2、YKL-40、p-Smad3、HIF-1α蛋白、N-cadherin和Vimentin表达均明显降低,E-cadherin蛋白表达增加。经过YKL-40过表达载体转染后,细胞YKL-40、N-cadherin、Vimentin蛋白明显增加,而E-cadherin蛋白表达却减少,Akt2和p-Akt2、p-Smad3、HIF-1α蛋白则无明显改变。收集上清Akt2 sh RNA稳转株细胞因子分泌降低,经过YKL-40过表达载体转染后,细胞TGF-β、YKL-40、VEGF分泌增加。

3、低氧条件下Akt2干扰后,抑制了CL1-5人肺腺癌细胞系细胞增殖、迁移、侵袭和小管生成;而YLK-40过表达能促进CL1-5细胞增殖、迁移、侵袭和小管生成。

4、小鼠皮下注射各组处理的CL1-5人肺腺癌细胞系细胞,Akt2 sh RNA稳转株注射小鼠肿瘤增长速度明显小于对照组,而经过YKL-40过表达病毒感染的Akt2 sh RNA稳转株注射小鼠肿瘤体积明显增大。第32天称量小鼠肿瘤,Akt2 sh RNA稳转株注射的小鼠肿瘤的重量明显小于对照组,而经过YKL-40过表达病毒感染的Akt2 sh RNA稳转株注射的小鼠肿瘤重量明显增加。

参考文献

[1]Global Cancer Statistics 2020:GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185 Countries.Sung Hyuna;Ferlay Jacques;Siegel Rebecca L.;Laversanne Mathieu;Soerjomataram Isabelle;Jemal Ahmedin;Bray Freddie.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2021

[2]Small cell lung cancer..Nature Reviews Disease Primers,2021

[3]TGFβ-induced metabolic reprogramming during epithelial-to-mesenchymal transition in cancer..Hua Wan;;Ten Dijke Peter;;Kostidis Sarantos;;Giera Martin;;Hornsveld Marten.Cellular and molecular life sciences:CMLS,2020

[4]Cancer burden of major cancers in China:A need for sustainable actions..Cao Maomao;;Li He;;Sun Dianqin;;Chen Wanqing.Cancer communications(London,England),2020

[5]王伟.低氧肿瘤微环境通过Akt-PDK1-YKL40通路诱导非小细胞肺癌侵袭性生长和血管生成[D].中国人民解放军海军军医大学,2023.