牛型放线菌PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

牛型放线菌PCR试剂盒是一种用于检测牛型放线菌的PCR试剂盒。牛型放线菌是一种常见的细菌，可以引起人和动物的感染。这种细菌通常存在于土壤、水和植物中，可以通过接触受污染的物体或食物而传播给人类。

牛型放线菌PCR试剂盒通常包括PCR反应液、引物和模板DNA等成分。使用时，将样品加入PCR反应液中，并在一定温度下进行PCR扩增。通过检测PCR产物的特异性序列，可以确定是否存在牛型放线菌的感染。

牛型放线菌PCR试剂盒的优点是灵敏度高、特异性强，可以在短时间内快速检测出感染情况。但是，使用时需要注意操作规范和质量控制，以避免假阳性或假阴性结果的发生。

牛型放线菌

牛型放线菌PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在牛型放线菌的感染。

应用^[4-5]

牛型放线菌PCR试剂盒可以用于反刍动物肠道共生放线菌类群多样性分析

研究同时用纯培养分离方法和不依赖于培养的分子生物学技术对健康散养牛羊粪便中的放线菌类群进行分析。

结果表明：1．通过纯培养分离方法从牛粪便中分离到共生放线菌5株，分别是：C1号链霉菌属(Streptomyces sp.C1)、C3号小单孢菌属(Micromonospora sp.C3)、C5号链霉菌属(Streptomyces sp.C5)、C8号拟无枝酸菌属(Amycolatopsis sp．C8)和C12号小单孢菌属(Micromonospora sp.C12)。通过纯培养分离方法从羊粪中分离到共生放线菌4株，分别是：S2号链霉菌属(Streptomyces sp.S2)、S6号纤维化纤维菌属(Cellulosimicrobium sp.S6)、S9号链霉菌(Streptomyces sp.S9)和S10号纤维化纤维菌属(Cellulosimicrobium sp.S10)。

2．利用牛型放线菌PCR试剂盒分子生态学技术分析表明：牛粪中放线菌种类主要为：分枝菌属(Mycobacterium)、红球菌属(Rhodococcus)和类诺卡氏菌属(Nocardioides)等类群；羊粪中放线菌种类主要为：气微菌属(Aeromicrobium)、链霉菌属(Streptomyces)和类诺卡氏菌属(Nocardioides)等类群。

3．抑菌试验和牛型放线菌PCR试剂盒分别选取了牛粪样品可培养放线菌97株，羊粪样品可培养放线菌139株，每种供试菌分别统计抑菌圈直径大小，其中牛粪样品可培养放线菌抗大肠杆菌菌株11株，占11.3%；抗枯草杆菌5株，占5.16%；抗念珠菌6株，占6.19%；抗酿酒酵母7株，占7.22%；抗红酵母6株，占6.19%；抗分枝杆菌4株，占4.12%；羊粪样品可培养放线菌抗大肠杆菌菌株26株，占18.7%；抗枯草杆菌5株，占3.6%；抗念珠菌6株，占4.32%；抗酿酒酵母13株，占9.35%；抗红酵母10株，占7.19%；抗分枝杆菌5株，占3.6%。牛羊粪便样品可培养放线菌的抑菌实验结果：羊粪样品可培养放线菌抗大肠杆菌(最大抑菌圈直径为25mm)、念珠菌(最大抑菌圈直径为40mm)、酿酒酵母菌(最大抑菌圈直径为40mm)、分枝杆菌(最大抑菌圈直径为40mm)能力强于牛粪样品放线菌；牛粪样品可培养放线菌抗枯草杆菌(最大抑菌圈直径为31mm)能力强于羊粪样品放线菌；牛羊粪样品可培养放线菌抗红酵母菌(最大抑菌圈直径均为40mm)的能力相当。综合分析抑菌圈整体数据表明：牛羊粪便样品可培养放线菌抗真菌能力强于抗细菌能力，羊粪样品可培养放线菌抗分枝杆菌普遍较强，可进一步深入研究。

参考文献

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[2]Metabolomics technology and bioinformatics.Vladimir Shulaev.Briefings in Bioinformatics,2006

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[4]Metabolomics:Current analytical platforms and methodologies.Warwick B.Dunn;;David.I.Ellis.Trends in Analytical Chemistry,2005

[5]曾华颖.反刍动物肠道共生放线菌类群多样性分析[D].中山大学,2012.