SK-LMS-1人阴户平滑肌肉瘤贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

SK-LMS-1人阴户平滑肌肉瘤贴壁细胞系是一种用于研究人阴户平滑肌肉瘤的细胞系。这种细胞系通常用于研究肿瘤的生物学特性、药物筛选和化疗药物敏感性等方面的研究。

SK-LMS-1人阴户平滑肌肉瘤贴壁细胞系具有一些独特的生物学特性，例如上皮样细胞形态、贴壁生长等。这种细胞系可以用于研究肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移等生物学行为，以及评估治疗效果和开发新的治疗策略。

SK-LMS-1人阴户平滑肌肉瘤贴壁细胞系是一种来源于人类阴户平滑肌肉瘤的贴壁细胞系。这种细胞系通常用于研究肿瘤的生物学特性、药物筛选和治疗等。

SK-LMS-1细胞系具有以下特点：

形态特征：细胞呈长梭形或多边形，大小约为10-30微米。

生长特性：SK-LMS-1细胞系在适宜的培养条件下，生长迅速，增殖能力强。

表达特征：SK-LMS-1细胞系表达多种肿瘤相关基因和蛋白，如ER、PR、HER2等。

药物敏感性：SK-LMS-1细胞系对多种抗肿瘤药物敏感，如紫杉醇、顺铂、吉非替尼等。

SK-LMS-1细胞系广泛应用于阴户平滑肌肉瘤研究，包括肿瘤的发病机制、诊断和治疗等方面。同时，由于其易于培养和操作，也被广泛应用于基础研究和药物筛选等领域。

SK-LMS-1人阴户平滑肌肉瘤贴壁细胞系

SK-LMS-1人阴户平滑肌肉瘤贴壁细胞系细胞培养操作

1)复苏SK-LMS-1人阴户平滑肌肉瘤贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)SK-LMS-1人阴户平滑肌肉瘤贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)SK-LMS-1人阴户平滑肌肉瘤贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

SK-LMS-1人阴户平滑肌肉瘤贴壁细胞系可以用于平滑肌肉瘤中miR-506的表达及其生物学意义

探索miR-506与间叶上皮转化(Mesenchymal to epithelial transition,MET)和DNA损伤同源重组修复信号通路之间的关系,为理解miR-506在平滑肌肉瘤中的具体生物学意义及发展潜在的治疗平滑肌肉瘤的手段提供依据。

方法：该项研究选取确诊为平滑肌肉瘤的61例患者,然后在病案室查阅、收集他们病历资料进行整理分析,对后续的生存状态进行电话随访。61例患者中有37例具有新鲜标本,37例具有新鲜标本的患者中有12例患者同时具有相对应的癌旁组织,我们通过应用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)技术对这37例新鲜平滑肌肉瘤标本和其中的12例患者的癌旁组织中miR-506表达量的高低进行相对定量,并对miR-506在癌与癌旁组织的表达量进行差异性对比分析。

从收集该到61例平滑肌肉瘤患者的肿瘤组织经过专业人员的制作成组织芯片,应用免疫组织化学SP染色的方法对芯片染色来检测组织中MET相关指标蛋白:上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)、β-链蛋白(β-catenin)、Slug和DNA损伤同源重组修复相关指标蛋白RAD51、RAD52、ATM、ATR的表达情况,然后进行后续的相关性分析。采用卡方检验分析法对miR-506的表达量、相关指标蛋白以及患者的临床病理特征之间进行相关性分析。通过采用Kaplan-Meier分析法对miR-506表达量以及各相关指标蛋白的表达情况对平滑肌肉瘤患者的总生存期及无进展生存期的影响进行分析。在SK-LMS-1人阴户平滑肌肉瘤贴壁细胞系中上调或者抑制miR-506的表达后,用MTT实验、平板克隆形成实验、划痕实验(Wound Healing)、Transwell体外迁移侵袭实验来验证miR-506对SK-LMS-1人阴户平滑肌肉瘤贴壁细胞系的增殖、迁移和侵袭性的作用;用Western blot方法来进一步验证miR-506对MET相关蛋白(E-cadherin,β-catenin,N-cadherin,Vimentin和Slug)和DNA损伤修复同源重组修复相关蛋白(RAD51,RAD52,ATM,ATR)表达的影响;用MTT、Western blot等方法来检测miR-506对平滑肌肉瘤细胞对顺铂和吡柔比星的药物敏感性的影响及其机制。

结果1.q RT-PCR的结果显示,平滑肌肉瘤新鲜标本中miR-506的表达量与癌旁组织相比降低(n=12,P=0.026),同时按照miR-506中位表达量将患者分为miR-506高表达组跟miR-506低表达组,miR-506高表达组患者的总生存优于miR-506低表达组的患者(OS:n=37,P=0.038)。这提示miR-506的表达有助于提高平滑肌肉瘤患者的预后。

参考文献

[1]miR-135b-5p Promotes migration,invasion and EMT of pancreatic cancer cells by targeting NR3C2.Zhengliang Zhang;;Xiangming Che;;Ni Yang;;Zhenghai Bai;;Yuan Wu;;Li Zhao;;Honghong Pei.Biomedicine&Pharmacotherapy,2017

[2]Tumors Sharply Increased after Ceasing Pazopanib Therapy for a Patient with Advanced Uterine Leiomyosarcoma:Experience of Tumor Flare.Terumi Tanigawa;;Shintaro Morisaki;;Hisanobu Fukuda;;Shuichiro Yoshimura;;Hisayoshi Nakajima;;Kohei Kotera;;Yoshio Yoshida.Case Reports in Obstetrics and Gynecology,2017

[3]Somatic Leiomyosarcoma of the Soft Tissues:A Single-Institutional Analysis of Factors Predictive of Survival in 164 Patients.Kamran Harati;;Adrien Daigeler;;Kim Lange;;Hiltrud Niggemann;;Ingo Stricker;;Hans-Ulrich Steinau;;Marcus Lehnhardt;;Ole Goertz.World Journal of Surgery,2017

[4]miR-506 functions as a tumor suppressor in glioma by targeting STAT3.Tao Peng;;Lixiang Zhou;;Ling Zuo;;Yongxin Luan.Oncology Reports,2016

[5]李锋.平滑肌肉瘤中miR-506的表达及其生物学意义[D].天津医科大学,2019.