戈氏放线菌PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

戈氏放线菌PCR试剂盒是一种用于检测戈氏放线菌的PCR试剂盒。戈氏放线菌是一种常见的细菌，可以引起人和动物的感染。这种细菌通常存在于土壤、水和植物中，可以通过接触受污染的物体或食物而传播给人类。

戈氏放线菌PCR试剂盒通常包括PCR反应液、引物和模板DNA等成分。使用时，将样品加入PCR反应液中，并在一定温度下进行PCR扩增。通过检测PCR产物的特异性序列，可以确定是否存在戈氏放线菌的感染。

戈氏放线菌PCR试剂盒的优点是灵敏度高、特异性强，可以在短时间内快速检测出感染情况。但是，使用时需要注意操作规范和质量控制，以避免假阳性或假阴性结果的发生。

戈氏放线菌PCR试剂盒

戈氏放线菌PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在戈氏放线菌的感染。

应用^[4-5]

戈氏放线菌PCR试剂盒可以用于封闭人群高龋无龋儿童牙菌斑生物膜微生物的构成分析

研究使用人类口腔微生物DNA微阵列(The Human Oral Microbe Identification Microarray,HOMIM)从种、系、型水平对封闭人群中高龋和无龋儿童牙菌斑中微生物细菌群类进行分析,比较封闭人群高龋和无龋儿童、及封闭人群与开放人群之间牙菌斑微生物的定植情况及数量的多样性改变,较全面认识微生物多样性与龋病发生的关系,并以戈氏放线菌PCR试剂盒荧光实时定量PCR检测了牙菌斑中几种公认的龋病相关细菌,与芯片结果比较和初步评价。

方法：菌斑样本分别取自30高龋儿童和20个无龋儿童的第一恒磨牙健康牙面,提取混合菌斑总DNA,行16S rRNA特异性序列片段PCR扩增,产物经荧光素Cy3-dCTP标记后与基于16SrRNA寡核苷酸探针所制备的HOMIM杂交,专用软件处理数据；应用戈氏放线菌PCR试剂盒荧光定量PCR(SYBR Green)检测牙菌斑中的变异链球菌,口腔链球菌,远缘链球菌,乳酸杆菌,内氏放线菌。聚类分析、两独立样本秩和检验及卡方检验等进行统计学分析。

结果：DNA微阵列分析发现(1)高龋组和无龋组共50名受试者第一恒磨牙菌斑样本中共检测到97个微生物种型或类群,分别归属于6个门类,35个属类。高龋组每一个体菌斑样本中微生物种型或类群的数量(中位数为30)低于无龋组(中位数为39)(P<0.05)。

(2) 一些菌属和细菌在无龋组中的戈氏放线菌PCR试剂盒检出率或数量高于高龋组,如拟杆菌属(Bacteroidetes[G-2]sp clone AU126ot274)、生痰二氧化碳噬纤维菌(Capnocytophaga sputigenaot775)、红棕色单胞菌属(Porphyromonas catoniae and sp clone CW034ot279)、嗜血杆菌(Haemophilus sp clone BJ095ot036)、纤细弯曲杆菌(Campylobacter gracilisot623)、昭和弯曲杆菌(Campylobacter showaeot763)、浅黄奈瑟氏菌(Neisseria flavescensot610)、戈登链球菌(Streptococcus gordoniiot622)、血链球菌(Streptococcus sanguinis and sp clone C3MLM097ot058758)、戈氏放线菌(Actinomyces gerencseriaeot618)、黏滑罗氏菌(Rothia mucilaginosaot681)(P<0.05)。

(3) 变异链球菌、远缘链球菌在高龋和无龋组中均无检出,内氏放线菌仅在无龋组中检出1例,乳杆菌仅在高龋组中检出1例。

(4) 开放人群比封闭人群戈氏放线菌PCR试剂盒多检出3个门2个属：脱铁杆菌门(Deferribacteres):互养菌属(Synergistetes[G-3])、螺旋体门(Spirochaetes):密螺旋体属(Treponema)、SR1门；

(5)高龋儿童群体：普雷沃氏菌属(Prevotella)、优杆菌属(Eubacterium)、口金氏菌(Kingella oralisot706AA77)、脱氮金氏菌(Kingella denitrificansot582W30)、戈氏放线菌(Actinomyces gerencseriaeot618)、戈登链球菌(Streptococcus gordoniiot622F49)、澳大利亚链球菌(Streptococcus australisAB83)、戈氏放线菌(Actinomyces gerencseriaeot618E46)、内氏放线菌(Actinomyces naeslundiiot176AC71)、小韦荣氏球菌(Veillonella parvulaot161AC37)、生痰月形单胞菌(Selenomonas sputigenaAB04)等在开放人群中的检出率(100%,100%,60%,70%,90%,90%,60%,60%,100%,70%)高于封闭人群(53.3%,26.7%,13.3%,13.3%,33.3%,40%,0,0,40%,20%)(P<0.05)；澳大利亚链球菌、儿童链球菌(Streptococcus infantis FN042ot065638)、戈氏放线菌(Actinomyces gerencseriaeot618)、生痰二氧化碳嗜纤维菌(Capnocytophaga sputigenaot775)、普雷沃氏菌属、弯曲杆菌属(Campylobacter)、韦荣球菌属(Veillonella)、嗜血杆菌属(Haemophilus)等检出量亦均高于封闭人群(P<0.05)。

参考文献

[1]Diversity and site-specificity of the oral microflora in the elderly.D.Preza;;I.Olsen;;T.Willumsen;;B.Grinde;;B.J.Paster.European Journal of Clinical Microbiology&Infectious Diseases,2009

[2]Microarray analysis of the microflora of root caries in elderly.D.Preza;;I.Olsen;;T.Willumsen;;S.K.Boches;;S.L.Cotton;;B.Grinde;;B.J.Paster.European Journal of Clinical Microbiology&Infectious Diseases,2009

[3]Bacterial persistence:some new insights into an old phenomenon.R.Jayaraman.Journal of Biosciences,2008

[4]Raman‐FISH:combining stable‐isotope Raman spectroscopy and fluorescence in situ hybridization for the single cell analysis of identity and function.Wei E.Huang;KilianStoecker;RobertGriffiths;LyndsayNewbold;HolgerDaims;Andrew S.Whiteley;MichaelWagner.Environmental Microbiology,2007

[5]秦杰.封闭人群高龋无龋儿童牙菌斑生物膜微生物的构成分析[D].遵义医学院,2011.