胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒是一种用于检测胎儿弯曲杆菌性病亚种的分子生物学试剂盒。该试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)技术，通过扩增胎儿弯曲杆菌性病亚种的DNA序列，从而实现对病原体的检测和诊断。

胎儿弯曲杆菌性病亚种是一种常见的细菌感染，主要通过性接触传播。该病亚种的症状包括尿道分泌物增多、尿频、尿急、尿痛等，严重时还可能导致尿道狭窄和尿路结石等并发症。

胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒的原理是利用特异性引物和荧光探针，扩增胎儿弯曲杆菌性病亚种的DNA序列。在PCR反应中，当引物与目标DNA序列结合时，会激活DNA聚合酶进行链式反应，从而扩增出大量的目标DNA片段。荧光探针则会与扩增产物结合，通过荧光信号的检测，可以确定是否存在胎儿弯曲杆菌性病亚种的感染。

胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒具有高灵敏度和特异性，能够快速准确地检测出感染情况。它在临床上广泛应用于胎儿弯曲杆菌性病亚种的诊断和治疗监测，对于指导临床治疗和预防疾病的传播具有重要意义。

胎儿弯曲杆菌

胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集尿液、分泌物等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在胎儿弯曲杆菌性病亚种的感染。

应用^[4-5]

胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒可以用于空肠弯曲杆菌基因诊断方法的建立及其应用

根据空肠弯曲杆菌VS1基因的序列设计一对特异引物(VS-F和VS-R)，建立了一种快速从食品和水中检测空肠弯曲杆菌的胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒定性PCR方法，并在此基础上以LightCycler为平台建立了两种定量检测空肠弯曲杆菌的实时荧光定量PCR方法(Real-time PCR)。一种是利用SYBRⅠ染料能特异与双链DNA结合而发荧光的特性，建立real-time PCR方法来定量检测空肠弯曲杆菌；另外一种是利用荧光能量传递技术(Fluorescene resonance energy transfer，FRET)和DNA合成酶的5’→3’活性，设计一条TaqMan探针，建立real-time PCR方法来定量检测空肠弯曲杆菌。

研究表明，三种PCR方法对空肠弯曲杆菌能特异的扩增出358bp片段，而其它结肠弯曲杆菌、胎儿弯曲杆菌、霍乱弧菌、创伤弧菌、沙门氏菌、大肠杆菌等均不能扩增出该片段，并且两种real-time PCR方法整个实验能在60min内完成。三种PCR方法的敏感度分别为8CFU／ml，5CFU／ml和5CFU／ml。用培养法、胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒定性PCR方法和基于TaqMan探针的real-time PCR方法对南京地区的屠宰场、超市和牛奶场等地300份鸡肉、300份生牛奶及300份井水及自来水进行空肠弯曲杆菌调查。定性PCR方法结果表明，30.6％(92／300)的鸡肉为阳性、27.3％(82／300)的生牛奶为阳性、13.6％(41／300)的水为阳性。Real-time PCR定量检测结果表明三种样品受空肠弯曲杆菌污染的程度较重。

对用培养法和胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒PCR法的检测结果进行比较，提示被PCR检测出来的空肠弯曲杆菌有一部分是死菌或VNC。上述结果说明，居民消费的鸡肉、牛奶和水如果加工不当或饮食习惯不卫生，会对其健康构成潜在的威胁。

参考文献

[1]Human disease associated with"Campylobacter upsaliensis"(catalase-negative or weakly positive Campylobacter species)in the United States.Patton D M,Shaffer N,Edmonds P,et al.J.Clin.Microbiol.1989

[2]Sutherland,and R.J.Owen.Inhibition of DNase activity in PFGE analysis of DNA from Campylobacter jejuni.Gibson,J.R.K.Lett.Appl.Microbiol.1994

[3]Rapid detection of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli isolated from clinical specimens using the polymerase chain reaction.V.Stonnet;;L.Sicinschi;;F.Mégraud;;J.L.Guesdon.European Journal of Clinical Microbiology&Infectious Diseases,1995

[4]Cloning and characterization of genes coding for ribosomal RNA inCampylobacter jejuni.Ayoub Raschtchian;Mark A.Abbott;Marilee Shaffer.Current Microbiology,1986

[5]阳成波.空肠弯曲杆菌基因诊断方法的建立及其应用[D].南京农业大学,2003.