NCI-H2126人非小细胞肺癌贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

NCI-H2126人非小细胞肺癌贴壁细胞系来自一位65岁肺腺癌患者的EBV转化淋巴母细胞系。NCI-H2126人非小细胞肺癌贴壁细胞系具有以下特性：

1.肺癌细胞系：NCI-H2126是一种人非小细胞肺癌细胞系，属于肿瘤细胞系，具有肿瘤细胞的特性和生物学行为。

2.贴壁生长：NCI-H2126细胞系需要在固体培养基表面贴壁生长，通过贴壁生长可以形成特定的细胞形态和组织结构。

3.无限增殖：在适宜的培养条件下，NCI-H2126细胞系可以无限增殖，数量不断增多。

4.遗传不稳定性：肺癌细胞系的遗传不稳定性较高，容易发生基因突变、染色体异常等变化，影响细胞的生长和分化。

5.对药物敏感：NCI-H2126细胞系对某些抗肿瘤药物敏感，可用于药物筛选和研究。

6.用于科研：NCI-H2126细胞系可用于肺癌研究、抗肿瘤药物筛选、化疗药物评价等领域。

NCI-H2126人非小细胞肺癌贴壁细胞系

NCI-H2126人非小细胞肺癌贴壁细胞系培养操作

1)复苏NCI-H2126人非小细胞肺癌贴壁细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)NCI-H2126人非小细胞肺癌贴壁细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)NCI-H2126人非小细胞肺癌贴壁细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

NCI-H2126人非小细胞肺癌贴壁细胞系可以用于IGF-1R/β-catenin信号通路在吉非替尼联合化疗治疗NSCLC耐药机制研究

化疗联合吉非替尼耐药是目前非小细胞肺癌治疗研究的热点,本研究进一步探索IGF-1R/β-catenin在化疗联合吉非替尼治疗非小细胞肺癌中的耐药机制。

方法:选取A549、NCI-H1299、NCI-H1437和NCI-H2126人非小细胞肺癌贴壁细胞系模拟临床治疗方案分别构建顺铂+紫杉醇耐药组(TC)、顺铂+紫杉醇+吉非替尼耐药组(TC+G)和吉非替尼耐药组(G)细胞株。通过CCK-8法测定A549、NCI-H1299、NCI-H1437和NCI-H2126人非小细胞肺癌贴壁细胞系的增殖能力和对各药物的IC50值;利用流式细胞术检测细胞细胞周期及凋亡;使用Transwell小室检测细胞的侵袭能力;通过基因测序法检测EGFR 18、19、20和21外显子的突变;使用Western-Blot免疫印迹法检测细胞内蛋白分子的表达;通过高表达质粒和小干扰RNA质粒的转染干扰细胞内基因的表达,从两个不同方向证明IGF-1R/β-catenin信号通路在耐药中发挥的作用。

结果:本研究成功诱导了四株A549、NCI-H1299、NCI-H1437和NCI-H2126人非小细胞肺癌贴壁细胞系的非小细胞耐药细胞,并在诱导耐药细胞过程中发现IGF-1R/β-catenin信号通路的异常活化与细胞的增殖、侵袭能力增强,细胞的IC50值和耐药增加以及细胞周期和凋亡的改变密切相关,同时,在耐药过程中IGF-1R/β-catenin信号通路内的蛋白P-IGF-1R、GSK-3β、P-GSK-3β、β-catenin以及P-β-catenin的表达均随耐药性的增高而出现增高趋势,同时影响了吉非替尼相关的P-EGFR蛋白的表达。为进一步研究,我们通过在未耐药细胞系中上调了IGF-1R的表达,使细胞系的增殖、侵袭能力以及耐药性均增强,还减少了细胞的凋亡伴随着其下游蛋白GSK-3β、P-GSK-3β、β-catenin以及P-β-catenin的表达增高。在耐药细胞中分别干扰了IGF-1R和β-catenin的基因表达,可见干扰后的耐药细胞的增殖速度下降,IGF-1R/β-catenin信号通路的中P-IGF-1R、P-GSK-3β、β-catenin以及P-β-catenin蛋白表达均下降,同时,对吉非替尼和顺铂的耐药性明显降低,其中,顺铂的耐药性下降最显著。

参考文献

[1]Targeting carbon nanotubes based on IGF-1R for photothermal therapy of orthotopic pancreatic cancer guided by optical imaging.Guan-Hua Lu;;Wen-Ting Shang;;Han Deng;;Zi-Yu Han;;Min Hu;;Xiao-Yuan Liang;;Chi-Hua Fang;;Xin-Hong Zhu;;Ying-Fang Fan;;Jie Tian.Biomaterials,2019

[2]Cancer statistics,2019.Rebecca L.Siegel MPH;;Kimberly D.Miller MPH;;Ahmedin Jemal DVM,PhD.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2019

[3]MiR-148a suppressed cell invasion and migration via targeting WNT10b and modulatingβ-catenin signaling in cisplatin-resistant colorectal cancer cells.Lei Shi;;Juanli Xi;;Ximing Xu;;Bo Peng;;Binghong Zhang.Biomedicine&Pharmacotherapy,2019

[4]Overcoming Resistance to AC0010,a Third Generation of EGFR Inhibitor,by Targeting c-MET andBCL-2.Wanhong Xu;;Wei Tang;;Tingting Li;;Xiaoying Zhang;;Yi Sun.Neoplasia,2019

[5]姜钧耀.IGF-1R/β-catenin信号通路在吉非替尼联合化疗治疗NSCLC耐药机制研究[D].遵义医科大学,2019.