人伯基特淋巴瘤细胞的应用

背景^[1-3]

人伯基特淋巴瘤细胞是一种来源于人类淋巴瘤的细胞系，通常用于研究淋巴瘤的发生、发展和治疗。这种细胞系具有一些独特的特征，如快速增殖、高度恶性和对化疗药物的敏感性等，使其成为研究淋巴瘤的重要工具。

人伯基特淋巴瘤细胞的遗传学特征与伯基特淋巴瘤患者体内的肿瘤细胞相似，因此该细胞系可以作为研究伯基特淋巴瘤的模型，用于探索该疾病的病因、病理生理机制和治疗方案等。

人伯基特淋巴瘤细胞(Burkitt lymphoma cell)是一种来源于B细胞的淋巴瘤细胞系。它是一种体外培养的肿瘤细胞系，可用于研究淋巴瘤的发生、发展和治疗。

人伯基特淋巴瘤细胞

人伯基特淋巴瘤细胞系的特点包括：

形态特征：人伯基特淋巴瘤细胞通常呈多边形或长条形，大小约为10-20微米左右。

功能特征：人伯基特淋巴瘤细胞具有高度增殖能力，可以快速分裂和增殖。此外，它们还具有分泌抗体和细胞因子等生物学功能。

纯度特征：人伯基特淋巴瘤细胞通常具有较高的纯度，即没有其他类型的细胞混杂在其中。这对于后续的实验研究非常重要，因为只有纯度高的细胞才能保证实验结果的准确性和可靠性。

来源特征：人伯基特淋巴瘤细胞通常来源于患者的淋巴瘤组织，可以通过手术或穿刺等方式获取。这些方法相对安全、简单，并且可以获得足够数量的细胞进行实验研究。

人伯基特淋巴瘤细胞培养操作

1)复苏人伯基特淋巴瘤细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)人伯基特淋巴瘤细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)人伯基特淋巴瘤细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

人伯基特淋巴瘤细胞可以用于LncRNA-PVT1下调抑制伯基特淋巴瘤细胞增殖的分子机制

探讨长链非编码RNA(long-non coding RNA,lncRNA)PVT1下调对人伯基特淋巴瘤细胞(Burkitt`s lymphoma,BL)(Raji和Namalwa)增殖抑制作用的分子机制,为开发以PVT1为靶点的肿瘤治疗提供科学的研究证据。

方法：借助生物信息学工具找寻BL组织中异常表达的lncRNA-PVT1与miRNA,借助Starbase与Jefferson数据库分析PVT1与miRNA位点的结合,筛选出下一步研究所关注的miRNA(miR-29b);运用CCLE数据库中1457个肿瘤细胞株的seq-RNA数据分析不同组织来源的细胞株PVT1和miR-29b的表达差异,同时分析两分子间的相关性。通过RNA干扰技术下调Raji细胞内PVT1后检测胞内miR-29b表达量的改变;采用双标荧光素酶报告实验证实两者间可在结合位点结合。运用RNA干扰、RNA小分子模拟物等技术研究PVT1和miR-29b对BL细胞增殖能力的影响;CCK8法用于检测人伯基特淋巴瘤细胞的增殖能力、流式分析细胞周期与凋亡的变化。qRT-PCR和Western-Blot用于检测改变PVT1和miR-29b表达量后Raji细胞周期相关蛋白CDK(CDK4)和CKI(CDKN1A/CDKN1B/CDKN2A)的基因及其蛋白的改变。

通过Western-Blot检测人伯基特淋巴瘤细胞在PVT1及miR-29b变化前后AKT/FOXO1信号通路的活化情况,同时使用FOXO1抑制剂(AS1842856)处理BL细胞观察细胞增殖能力及细胞周期的改变,并检测周期相关蛋白的表达情况。

结果：数据库的分析结果显示,人伯基特淋巴瘤细胞与正常淋巴组织组相比,BL组中PVT1和miR-29b的表达量均有明显改变,具体为BL组中PVT1的表达量上调1.7倍(p<0.001),相反地,miR-29b则下调大于4倍(p=0.003)。对CCLE数据库所收集的44种不同组织来源肿瘤细胞株中PVT1与miR-29b表达量的相关性分析结果显示两者间有显著负相关(r2=-0.359,p=0.031),但MYC与miR-29b的表达量之间并没有发现明显相关关系(r2=-0.243,p=0.167)。

采用Starbase和Jefferson数据库对PVT1和miR-29b结合位点分析的结果显示,PVT1 RNA的3`非翻译区(UTR)存在miR-29b的结合位点(chr8:128952169-128952190[+]);此外,在Raji细胞内下调PVT1的实验发现,伴随Raji细胞内PVT1表达量降低可诱导miR-29b表达量上升(p<0.05);双标荧光素报告基因实验进一步证实miR-29b可结合到PVT1的3`-UTR(p<0.05)。下调PVT1亦或升高miR-29b均显著抑制Raji和Namalwa细胞的增殖(p<0.05),而且增殖抑制效应被联合使用miR-29b抑制物削弱(p<0.05);在Raji和Namalwa细胞PVT1的下调和miR-29b的上调诱导了细胞周期G0/G1阻滞(p<0.05),该效应同样可被miR-29b抑制物的处理部分抵消。周期相关基因的mRNA与蛋白水平的检测结果显示,下调PVT1或是上调miR-29b均导致CDKN1A/CDKN1B/CDKN2A表达量增加和CDK4表达量降低;

同时,伴随着PVT1和miR-29b表达量的改变Raji细胞内AKT/FOXO1信号通路的活性也发生变化。AKT/FOXO1信号通路下游的FOXO1功能的研究表明,抑制FOXO1活性降低了人伯基特淋巴瘤细胞增殖能力和阻碍了细胞周期的进程,以G0/G1期改变为主,这与p-FOXO1(Ser319)含量的下降有关,同时,FOXO1的抑制导致了细胞周期相关蛋白CKI和CDK表达水平的改变。

参考文献

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