NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系是一种广泛用于肺癌研究的人源性细胞系。这种细胞系具有小细胞肺癌的典型特征，可以用于探讨肺癌的发生机制、研究抗癌药物的作用以及筛选新的治疗策略等。

NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系具有以下典型特征：

细胞形态：NCI-H1048细胞系为小细胞肺癌细胞系，其细胞形态较小，呈现出圆形或卵圆形。

生长特性：NCI-H1048细胞系为贴壁生长型细胞系，需要在固体培养基上生长，并且需要特定的培养条件。

染色体数目异常：NCI-H1048细胞系的染色体数目异常，通常存在非整倍体现象。

表达肿瘤特异性抗原：NCI-H1048细胞系表达肿瘤特异性抗原，这些抗原可以作为肿瘤免疫治疗的靶点。

对化疗药物的敏感性：NCI-H1048细胞系对化疗药物较为敏感，可用于抗癌药物的研究和筛选。

NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系

NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞培养操作

1)复苏NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系可以用于8-溴-7-甲氧基白杨素对IL-6诱导小细胞肺癌发生EMT作用的影响

1.研究IL-6诱导对人小细胞肺癌NCI-H446及NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞发生上皮-间充质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的表型作用。

2.证明在人小细胞肺癌NCI-H446及NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞中,IL-6激活STAT3信号通路的表达。

3.测定8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxychrysin,BrMC)对IL-6诱导人小细胞肺癌NCI-H446及NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞EMT的影响。

方法:1.人小细胞肺癌NCI-H446及NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞体外培养。

2.PCR分析人小细胞NCI-H446及NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞IL-6受体和凋亡蛋白抑制因子(Inhibitor of apoptosis protein,IAP)mRNA表达。

3.用相差显微镜观察IL-6诱导人小细胞肺癌NCI-H446及NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞EMT形态变化。

4.Western blot分析IL-6诱导人小细胞肺癌NCI-H446及NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞STAT3、p-STAT3、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达的影响。

5.Western blot分析BrMC对IL-6诱导人小细胞肺癌NCI-H446及NCI-H1048人小细胞肺癌贴壁细胞系的EMT表型以及STAT3、p-STAT3、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达的影响。

结果:1.IL-6能诱导人小细胞肺癌NCI-446细胞发生EMT细胞形态学改变,其从上皮细胞形态转变成多边形、梭形,有伪足生成。

2.IL-6激活人小细胞肺癌NCI-H446细胞STAT3信号通路,p-STAT3、N-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.05)、E-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.05)。

3.BrMC能显著抑制IL-6诱导的EMT表型。

4.BrMC能显著上调IL-6诱导EMT表型E-cadherin的表达(P<0.05),并显著下调STAT3、p-STAT3蛋白和N-cadherin蛋白的表达(P<0.05)。

结论:1.BrMC能有效抑制IL-6诱导人小细胞肺癌NCI-H446细胞EMT。2.BrMC抑制EMT发生的作用机制可能与其下调p-STAT3蛋白表达相关。

参考文献

[1]Leukotriene B4 induces EMT and vimentin expression in PANC-1 pancreatic cancer cells:Involvement of BLT2 via ERK2 activation.You Ri Kim;;Mi Kyung Park;;Gyeong Jin Kang;;Hyun Ji Kim;;Eun Ji Kim;;Hyun Jung Byun;;Moo-Yeol Lee;;Chang Hoon Lee.Prostaglandins,Leukotrienes and Essential Fatty Acids(PLEFA),2016

[2]Signalling pathways associated with IL‐6 production and epithelial–mesenchymal transition induction in prostate epithelial cells stimulated with Trichomonas vaginalis.I.H.Han;;J.H.Kim;;S.S.Kim;;M.H.Ahn;;J.S.Ryu.Parasite Immunology,2016

[3]National estimates of cancer prevalence in China,2011.Rongshou Zheng;;Hongmei Zeng;;Siwei Zhang;;Tianhui Chen;;Wanqing Chen.Cancer Letters,2016

[4]The STAT3 pathway as a therapeutic target in head and neck cancer:Barriers and innovations.Jessica L.Geiger;;Jennifer R.Grandis;;Julie E.Bauman.Oral Oncology,2016

[5]唐甜.8-溴-7-甲氧基白杨素对IL-6诱导小细胞肺癌发生EMT作用的影响[D].南华大学,2018.