NCM356结直肠腺癌贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

NCM356结直肠腺癌贴壁细胞系是一种用于研究结直肠癌的细胞系。这种细胞系具有一些独特的特性，如对化疗药物的敏感性、表达肿瘤特异性抗原等，可以用于研究结直肠癌的发生机制、发展过程以及抗癌药物的筛选和评估等。

在研究结直肠癌时，NCM356细胞系通常被用于建立动物模型或细胞培养模型，以便更好地模拟结直肠癌的生物学行为和疾病进程。通过使用这种细胞系，研究人员可以更深入地了解结直肠癌的细胞生物学、分子机制以及潜在的治疗靶点，从而为开发新的抗癌药物和治疗策略提供有力的支持。

NCM356结直肠腺癌贴壁细胞系

NCM356细胞系的特点包括：

贴壁生长：NCM356细胞系在体外培养时，会形成紧密的细胞团，这使得它们容易进行实验操作。

高增殖率：NCM356细胞系具有较高的增殖率，这使得它们可以快速地扩增，从而方便进行各种实验。

良好的稳定性：NCM356细胞系在多次传代后，其形态和生物学特性仍然保持稳定。

高分化程度：NCM356细胞系具有较高的分化程度，这使得它们可以更好地模拟人类结直肠癌的病理生理过程。

NCM356结直肠腺癌贴壁细胞系细胞培养操作

1)复苏NCM356结直肠腺癌贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)NCM356结直肠腺癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)NCM356结直肠腺癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

NCM356结直肠腺癌贴壁细胞系可以用于叶酸缺乏对不同状态结肠细胞FOLR1表达和染色体不稳定性的影响

为探讨不同氧化态叶酸缺乏对不同状态结肠细胞FOLR1表达和细胞基因组稳定性的影响与差异,本研究从叶酸对人正常/结肠癌细胞FOLR1转录与翻译的影响及差异、叶酸对二受试细胞染色体不稳定性(Chromosome Instability,CIN)的影响二个层面进行分析,以RPMI-1640培养基为对照(叶酸2266nmol/L),选取还原态的5-methyltetrahydrofolate(5-MeTHF)和氧化态的Folic Acid(FA)缺乏浓度(22.66 nmol/L)、维持基因组结构稳定的充足浓度(226.6 nmol/L)干预培养人结肠腺癌细胞COLO205、NCM356结直肠腺癌贴壁细胞系、人正常结肠上皮细胞CCD-841-CoN(CCD)28天,取培养第14天和第28天细胞提取总RNA和总蛋白,用RT-qPCR及2-ΔΔCT法分析受试细胞二个时段FOLR1基因转录表达情况;用Western Blotting检测二个时段干预后FOLR1蛋白表达情况;在干预培养的第9、18、27天,用胞质分裂阻断微核试验(Cytokinesis-Block Micronucleus assay,CBMN)检测二受试细胞株的CIN水平。

研究结果显示:(1)在自然状态下,CCD细胞的FOLR1蛋白相对表达显著低于COLO205细胞(P<0.001)。

(2) 二种状态的叶酸干预14和28天,COLO205细胞FOLR1转录和蛋白表达变化趋势一致;叶酸浓度降低,FOLR1转录(P<0.0010.01)和蛋白(P<0.010.05)表达显著升高;且在叶酸缺乏(22.66 nmol/L)时,CIN率显著高于对照(2266nmol/L,P<0.01)。在NCM356结直肠腺癌贴壁细胞系、CCD细胞中,叶酸缺乏(22.66 nmol/L)时,14天干预时FOLR1转录(P<0.001)和蛋白(P<0.010.05)较对照组显著升高;而干预28天时,叶酸缺乏引起CCD细胞的FOLR1转录(P<0.001)和蛋白(P<0.010.05)表达显著低于对照,同时,叶酸缺乏引起CCD细胞的CIN率显著高于对照组(P<0.010.05)。

(3)不同氧化态叶酸干预对COLO205和CCD细胞FOLR1转录影响程度存在差异,在叶酸缺乏浓度(22.66 nmol/L)下,5-MeTHF对二种受试细胞FOLR1转录表达上调作用显著强于FA组(P<0.01)。

参考文献

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