吗啉-4-基乙酸的LC-MS/MS测定法

背景技术

卡非佐米是由Onyx制药公司研制的新型蛋白酶体抑制剂，是继硼替佐米之后对难治性骨髓瘤有显著疗效的抗肿瘤药，于2012年7月由美国FDA批准上市，2014年1月在中国进行国际多中心临床试验，用于多发性骨髓瘤的治疗。吗啉-4-基乙酸(2)和(2S)-2-氨基-4-甲基-1-[(2R)-2-甲基环氧乙烷基]-1-戊酮(3)为合成卡非佐米中的重要起始原料，其中后者结构中含环氧基团具有潜在的遗传毒性。

根据欧洲药品管理局(EMEA)《遗传毒性杂质限度指导原则》的相关规定，采用毒理学关注阈值 (threshold of toxicological concern，TTC)评价药物的安全性，TTC值规定遗传毒性杂质的最大日服用量为不超过1.5ug。以卡非佐米的日服用量60mg计算， 卡非佐米中含化合物(3)应不超过25ug/g。卡非佐米尚未被各国药典收录，且尚未见卡非佐米中吗啉-4-基乙酸和化合物3的分析方法报道。

检测方法

1、质谱条件

离子源ESI⁺；喷雾电压(IS)4500V；雾化温度400℃；雾化气NEB(GAS1)40L/min；气帘气(CUR)20L/min；碰撞气(CAD)6L/min；辅助气AUX(GAS2)60L/min；检测方式多离子反应监测(MRM)；监测离子对m/z146.1→m/z100.1(2)和m/z172.2→m/z86.1(3)，碰撞诱导解离(CID)电压27V；驻留时间(dwell time)100ms。

2、色谱条件

色谱柱Waters Xbridge shield RP18柱(4.6mm×150mm，3.5um)；流动相1mmol/L乙酸铵溶液(用乙酸调至pH5.5)∶乙腈(30∶70)；流速0.5ml/min；柱温室温；进样量10ul。

3、溶液配制

供试品溶液：精密称取卡非佐米10mg，置10ml量瓶中，加50％乙腈溶解并定容，摇匀，作为供试品溶液。

吗啉-4-基乙酸(2)、3对照品溶液：精密分别称取2和3(10mg)，各置100ml量瓶中，加50％乙腈溶解并定容，摇匀，制成2和3浓度均为0.1mg/ml的溶液。分别精密量取上述溶液适量，用50％乙腈稀释制成2和3浓度为500和20ng/ml的混合溶液，作为2、3对照品溶液。

标准曲线溶液：分别精密称取吗啉-4-基乙酸100mg和3 10mg，置100ml量瓶中，加50％乙腈溶解并定容，摇匀，制成吗啉-4-基乙酸和化合物3浓度为1.0和0.1mg/ml的混合溶液，精密量取该溶液1ml，置100ml量瓶中，加50％乙腈溶解并定容，作为线性贮备液。精密量取线性贮备液适量，用50％乙腈稀释制成含吗啉-4-基乙酸浓度为100、300、500、1000、2000和3000ng/ml，含化合物3浓度为10、30、50、100、200和300ng/ml的系列溶液，作为标准曲线溶液。

参考文献

[1]李海霞,白培锋,刘娜等.卡非佐米中基因毒性杂质和吗啉乙酸的LC-MS/MS法测定[J].中国医药工业杂志,2016,47(10):