SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系是一种人恶性黑色素瘤贴壁细胞系，由美国国立癌症研究所（National Cancer Institute）建立。该细胞系是通过手术切除的黑色素瘤组织进行传代培养而建立的，因此具有贴壁生长的特性。

SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系被广泛应用于黑色素瘤研究，包括黑色素瘤的发生、发展、治疗和药物筛选等方面的研究。该细胞系具有较高的异质性，可以作为黑色素瘤研究的模型之一。

SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系

SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系细胞培养操作

1)复苏SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×10⁶~1×10⁷/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系可以用于敲低潜在转化生长因子β结合蛋白2(LTBP2)抑制SK-MEL-28恶性黑素瘤细胞的侵袭和迁移

检测潜在转化生长因子β结合蛋白2(LTBP2)在恶性黑素瘤组织及细胞中的表达,及其对恶性黑素瘤细胞侵袭和迁移的影响。

方法：采用免疫组织化学染色法检测95例恶性黑素瘤组织LTBP2的表达,并采用Spearman秩相关法分析LTBP2阳性率与黑素瘤临床病理指标的关系。采用实时定量PCR检测恶性黑素瘤组织和SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系LTBP2的mRNA水平,Western blot法检测SK-MEL-28黑素瘤细胞LTBP2的蛋白水平。利用小干扰RNA技术沉默SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系细胞中LTBP2的表达,TranswellTM实验检测敲低LTBP2后对SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系细胞侵袭能力的影响,细胞划痕实验检测对细胞迁移的影响。结果恶性黑素瘤组织中LTBP2阳性率显著高于皮肤良性痣组织,LTBP2阳性率与恶性黑素瘤患者TNM分期、远处转移及淋巴结转移正相关。LTBP2在SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系细胞中的表达高于正常黑素HEMa-LP细胞。敲低SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系细胞LTBP2的水平后,SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系细胞侵袭和迁移能力降低。

结论：LTBP2在皮肤恶性黑素瘤组织和细胞高表达,敲低SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系细胞LTBP2的水平后,抑制SK-MEL-28人恶性黑色素瘤贴壁细胞系细胞的侵袭及迁移。

参考文献

[1]FAK inhibition reduces metastasis ofα4 integrin-expressing melanoma to lymph nodes by targeting lymphatic VCAM-1 expression.Kyuho Jeong;;James M.Murphy;;Yelitza A.R.Rodriguez;;Jun-Sub Kim;;Eun-Young Erin Ahn;;Ssang-Taek Steve Lim.Biochemical and Biophysical Research Communicatio,2019

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[3]Cancer statistics,2019.Rebecca L.Siegel MPH;;Kimberly D.Miller MPH;;Ahmedin Jemal DVM,PhD.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2019

[4]LTBP2 knockdown and oxidative stress affect glaucoma features including TGFβpathways,ECM genes expression and apoptosis in trabecular meshwork cells.Fatemeh Suri;;Shahin Yazdani;;Elahe Elahi.Gene,2018

[5]王丽娟,席文锦,葛睿等.敲低潜在转化生长因子β结合蛋白2(LTBP2)抑制SK-MEL-28恶性黑素瘤细胞的侵袭和迁移[J].细胞与分子免疫学杂志,2019,35(02):128-133.