CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系是一种实验细胞，主要用于科学研究。它源自人鼻咽癌细胞，经分离、传代、冻存等步骤制成。这种细胞系具有广泛的应用价值，如鼻咽癌研究、抗癌药物筛选等。

鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，发病率较高，且易于转移。因此，对鼻咽癌的研究具有重要的临床意义。CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系就是在这种背景下建立起来的。

CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系具有以下特点：

来源：CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系来源于中国南方地区的一种鼻咽癌组织，经过体外培养和传代，形成了稳定的细胞系。

形态特征：CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系的细胞形态为多角形或长方形，核大而明显，胞质丰富。

生长特性：CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系生长迅速，传代周期短，适合进行实验室研究。

生物学特性：CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系具有较高的增殖活性和侵袭性，适合用于研究鼻咽癌的生物学特性、药物敏感性、基因表达等方面的内容。

CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系

CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备基础培养基(GIBCO，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸钠0.11g/L)；优质胎牛血清，10%。

2）CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二．CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系细胞处理：

1）复苏CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

应用^[4-5]

CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系可以用于亚砷酸体外抗人鼻咽癌细胞作用的实验研究

通过体外亚砷酸对CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系的增殖抑制，凋亡诱导及其相关蛋白表达的影响，探索亚砷酸发挥抗鼻咽癌细胞作用及诱导凋亡的可能机制。

方法：体外抗增殖研究：

1. MTT法体外CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系培养于含不同浓度的亚砷酸、顺铂、5一氟脉嚓咙，空白培养基作为对照;应用研T法检测24h、48h、72h和96h细胞的生长抑制率。

2. 倒置显微镜观察CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系细胞生长状态。

3. HE染色观察CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系细胞形态。

4. 流式细胞仪(FCM)分析CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系细胞周期改变。

5. 细胞增殖标志检测免疫组织化学染色方法检测反映肿瘤细胞增殖活性的增殖细胞核抗原(PCNA)及人端粒酶催化亚基(hTRT)蛋白表达。

诱导凋亡研究:

1.形态学采用HE染色、Hoechst 33342/PI双染色在荧光显微镜下观察细胞、透射电子显微镜观察亚砷酸作用下CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系凋亡形态改变。

2流式细胞仪(F以)检测凋亡的“亚二倍体”峰。

3. TIJNEL法原位观察CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系凋亡细胞。

4. 免疫组织化学染色法(工HC)检测亚砷酸诱导CNEI细胞凋亡相关蛋白Bax、Bel一2、p53的表达。

结果:抗增殖作用

1. MTT法体外实验显示亚砷酸能显著抑制CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系的增殖且有时间及浓度依赖性，随着剂量增加和作用时间的延长亚砷酸抑制CNEI细胞增殖能力增强;相同质量浓度的亚砷酸体外抑瘤能力优于顺铂及5一氟脉嚓咙。亚砷酸的Ic5。值在24h、48h、72h和96h分别为3.12 pg/mL、0.65 pg/InL、0.12p g/毗和0.08 pg/mL。

2.倒置显徽镜观察亚砷酸作用组CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系体积缩小、折光性变弱，2003年5月林英城:亚砷酸体外抗人鼻咽癌细胞作用的实验研究(硕士毕业论文丫贴壁细胞减少，脱落细胞增多。且随着亚砷酸浓度的增加和作用时间的延长更为明显。对照组细胞贴壁生长、镶嵌状排列铺满瓶壁。

3.HE染色未加药对照组，细胞呈圆形、椭圆形，核浆比例大，可见核分裂相;亚砷酸作用组可见凋亡细胞。

4.FCM随着亚砷酸浓度的增加和作用时间的延长，其GZ/M比例逐渐增高。

5.PCNA及hTRT免疫组织化学染色可见PCNA及hTRT阳性细胞平均灰度值随着亚砷酸浓度的增加而逐渐减少。

参考文献

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