头状葡萄球菌PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

头状葡萄球菌PCR试剂盒是一种用于检测头状葡萄球菌的专用试剂盒，它采用PCR（聚合酶链式反应）技术，通过对头状葡萄球菌的特异性基因进行扩增，从而快速、准确地检测出样品中是否存在头状葡萄球菌。

头状葡萄球菌PCR试剂盒的组成通常包括PCR反应液、引物、探针等，其中PCR反应液是核心成分，包含了PCR反应所需的各种酶和缓冲液等。引物和探针则是针对头状葡萄球菌特异性基因设计的，用于扩增和检测该菌种的特定基因片段。

使用头状葡萄球菌PCR试剂盒进行检测时，需要按照说明书上的操作步骤进行，通常包括样品处理、PCR反应液的配制、PCR扩增及产物检测等步骤。在PCR反应中，需要控制好反应温度、时间、循环次数等参数，以确保扩增的特异性和敏感性。

头状葡萄球菌PCR试剂盒

头状葡萄球菌PCR试剂盒具有以下特点：

1.灵敏度高：能够检测到非常低浓度的头状葡萄球菌DNA。

2.特异性强：能够准确区分头状葡萄球菌和其他常见病原体。

3.操作简便：只需要将样本加入到酶标板中，加入PCR反应液和DNA提取液，经过一定时间的反应后即可得到结果。

头状葡萄球菌PCR试剂盒广泛应用于医学、食品安全等领域，可以用于检测食品、水体、土壤等样本中是否存在头状葡萄球菌的污染。

应用^[4-5]

头状葡萄球菌PCR试剂盒可以用于头状葡萄球菌和表皮葡萄球菌临床株对利奈唑胺耐药的分子机制及其同源性研究

探讨头状葡萄球菌和表皮葡萄球菌临床株对利奈唑胺耐药的分子机制及其同源性,为医院感染的预防和控制及抗生素的合理使用提供依据。

方法：35株葡萄球菌收集自7所教学医院的住院患者,包括30株头状葡萄球菌(28株对利奈唑胺耐药,2株对利奈唑胺敏感)和5株对利奈唑胺耐药的表皮葡萄球菌。通过梅里埃Vitek-2 Compact系统对菌株重新鉴定和药敏试验。利奈唑胺耐药cfr和optrA基因则通过头状葡萄球菌PCR试剂盒扩增和产物测序确定。脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)检测菌株之间的同源性。S1核酸内切酶脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE)检测菌株携带的质粒数目和大小。基于Illumina和PacBio RSⅡ(SMRT)测序平台,对分离自不同医院携带cfr基因的部分菌株进行全基因组测序,然后利用ResFinder和ISFinder等软件对数据进行分析。染色体和质粒结构分析图采用InkScape0.48.1软件绘制。

结果①对利奈唑胺耐药的28株头状葡萄球菌和5株表皮葡萄球菌对青霉素、红霉素、环丙沙星、左氧氟沙星和莫西沙星的耐药率均为100%,而且对苯唑西林的耐药率也分别高达96.4%和80%。

②经头状葡萄球菌PCR试剂盒扩增和产物测序确认,28株利奈唑胺耐药的头状葡萄球菌和5株利奈唑胺耐药的表皮葡萄球菌携带cfr基因阳性率分别为82.1%(23/28)和80%(4/5),而2株利奈唑胺敏感的头状葡萄球菌未检出。另外,这35株葡萄球菌的optrA基因全部为阴性。

③PFGE和聚类分析结果显示:30株头状葡萄球菌分为3群(A～C),其Dice相似系数为74.9%～100.0%;5株表皮葡萄球菌的PFGE几乎一致,其Dice相似系数为89.2%～100.0%,而且这5株表皮葡萄球菌的MLST均属于ST 22型。这些结果表明利奈唑胺耐药的头状葡萄球菌和表皮葡萄球菌都在医院存在克隆传播。

④通过高通量测序技术平台,获得3株头状葡萄球菌(QD2、QD12和QD40)和1株表皮葡萄球菌QD39的染色体和质粒的全序列。生物学信息分析显示:头状葡萄球菌QD2、QD12和QD40各有1条染色体和3个质粒,且携带的cfr基因分别位于质粒上(分别命名为pHJP338-2、pHJP381-2和pHJP410-3);表皮葡萄球菌QD39含有1条染色体(HJP409-chr)和1个质粒,但携带的cfr基因位于染色体HJP409-chr上。

⑤比较基因组学分析显示,携带cfr基因的质粒pHJP338-2、pHJP381-2和pHJP410-3与携带cfr基因的MRSA菌株LRSA417的质粒pLRSA417(GenBank No:KJ922127.1)的序列高度相似(覆盖率高达100%,核酸一致性99.17%)。另外,表皮葡萄球菌QD39染色体HJP409-chr的cfr区域由ISEnfa4-orf1-cfr-ISEnfa4组成,也与MRSA菌株LRSA417的质粒pLRSA417(GenBank No:KJ922127.1)中相对应的序列高度相似。

参考文献

[1]Overview of Changes to the Clinical and Laboratory Standards Institute Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing,M100,31st Edition..Humphries Romney;Bobenchik April M;Hindler Janet A;Schuetz Audrey N.Journal of clinical microbiology,2021

[2]Staphylococcus capitis and NRCS-A clone:the story of an unrecognized pathogen in neonatal intensive care units.F.Laurent;;M.Butin.Clinical Microbiology and Infection,2019

[3]Molecular Epidemiology and Mechanisms of 43 Low-Level Linezolid-Resistant Enterococcus faecalis Strains in Chongqing,China..Hua Ruoyi;;Xia Yun;;Wu Wenyao;;Yang Mi;;Yan Jia.Annals of laboratory medicine,2019

[4]Coagulase-Negative Staphylococcus Skin and Soft Tissue Infections..Natsis Nicola E;;Cohen Philip R.American journal of clinical dermatology,2018

[5]房钰良.头状葡萄球菌和表皮葡萄球菌临床株对利奈唑胺耐药的分子机制及其同源性研究[D].青岛大学,2023.