NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系是一种来源于肺癌病人的细胞系，具有肺腺癌的典型特性。NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系细胞系在培养中表现出贴壁生长的模式，属于非小细胞肺癌的一种。以下是关于NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系的详细介绍：

NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系起源和特性：NCI-H1573细胞系起源于一名64岁的女性肺癌患者的肺组织。这名患者在1986年接受了右肺下叶切除手术，病理诊断为低分化腺癌。这种细胞系具有腺癌细胞系的形态和特性，例如形成腺样结构，表达一些与腺癌相关的基因和蛋白等。

NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系

NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系培养条件：NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系需要在含有10%胎牛血清、青霉素/链霉素以及1%的非必需氨基酸的RPMI-1640培养基中培养。培养条件为37℃、5%CO2的恒温细胞培养箱。

NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系基因表达特征：与正常肺组织相比，NCI-H1573细胞系中存在一些基因表达的改变，包括一些与肺癌相关的基因。这些基因的异常表达与肺癌的发生和发展有一定的关联。

NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系生物学功能：NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系可以用于研究肺癌的发生机制、肺癌细胞的生物学行为以及新药的开发和筛选等。

NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备基础培养基(GIBCO，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸钠0.11g/L)；优质胎牛血清，10%。

2）NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二．NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系细胞处理：

1）复苏NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

应用^[4-5]

NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系可以用于Glypican-5调控肺腺癌侵袭转移的功能及机制研究

探讨GPC5调控LAC(lung adenocarcinoma,市腺癌)侵袭转移的相关功能及机制研究。

[方法]：1.对134例LAC患者的新鲜肺癌组织及对应正常肺组织的手术标本GPC5mRNA的表达水平进行了实时定量PCR检测,数据分析基于样本的临床相关资料。还选取了包含75例LAC样本的组织芯片进行免疫组化检测和生存分析。

2. 实时定量PCR和Western blot的方法检测NSCLC(Non-small-cell lung carcinoma,非小细胞肺癌)细胞系中GPC5的表达,从中选择了两株LAC细胞系A549和NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系进行体外细胞功能学实验。通过慢病毒介导构建过表达GPC5的LAC稳转细胞株,并使用细胞划痕、Transwell小室和CCK-8实验分别检测细胞的迁移、侵袭和增殖能力。PI单染法检测细胞周期。建立肿瘤转移以及肺原位肿瘤动物模型进行体内实验。

3. Phalanx OneArray6.1全基因组表达谱芯片分析了过表达GPC5后NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系细胞株中Wnt/β-catenin经典信号通路中的相关基因的表达变化,并挑选了E-cadherin、wnt3a、wnt5a/b、p-GSK-3β、cyclinD1、MMP2、MMP9、MMP7进行Western blot蛋白检测验证。免疫荧光检测过表达GPC5对Wnt/β-catenin经典通路中关键蛋白β-catenin和E-cadherin表达的影响。TOP/FOP荧光素酶报告基因检测β-catenin和TCF-4活性。免疫共沉淀技术检测GPC5和wnt3a的作用关系。

4. Spearman、Pearson和Cox多因素回归模型分析GPC5-wnt3a-E-cadherin-MMP9通路在LAC临床样本中的相关性研究。

[结果]：1.GPC5mRNA在淋巴结转移组(N1-2组中)的表达水平显著低于无淋巴结转移组(NO组)。

2.组织芯片结果提示GPC5的阳性表达组的总体生存率显著高于阴性表达组。

3.体外实验证明,过表达GPC5能显著抑制LAC细胞系A549、NCI-H1573人肺癌腺癌贴壁细胞系的迁移、侵袭和增殖能力。

参考文献

[1]Heparan Sulfate Proteoglycans and Human Breast Cancer Epithelial Cell Tumorigenicity.Rachel K.Okolicsanyi;;Andre J.van Wijnen;;Simon M.Cool;;Gary S.Stein;;Lyn R.Griffiths;;Larisa M.Haupt.J.Cell.Biochem.,2014

[2]Variants in the 5′-upstream region of GPC5 confer risk of lung cancer in never smokers.Li Liu;;Rong Zhong;;Li Zou;;Jinjian Fu;;Beibei Zhu;;Wei Chen;;Xiaohua Ye;;Yanhui Gao;;Yi Yang;;David C.Christiani;;Sidong Chen;;Xiaoping Miao.Cancer Epidemiology,2014

[3]Cancer statistics,2014.Rebecca Siegel;;Jiemin Ma;;Zhaohui Zou;;Ahmedin Jemal.CA A Cancer Journal for Clinicians,2014

[4]The role of glypicans in Hedgehog signaling.Jorge Filmus;;Mariana Capurro.Matrix Biology,2014

[5]杨欣.Glypican-5调控肺腺癌侵袭转移的功能及机制研究[D].南京医科大学,2015.