SNU-182人肝癌贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

SNU-182人肝癌贴壁细胞系是一种常用的细胞系，属于肝癌细胞的一种，常用于肝癌研究和治疗等方面。以下是关于SNU-182人肝癌贴壁细胞系的简要介绍：

SNU-182人肝癌贴壁细胞系起源和特性：SNU-182人肝癌贴壁细胞系是由一名24岁的亚洲男性患者的肝组织中分离出来的。该细胞系具有单个细胞核，可以通过Southern blot检测到乙型肝炎病毒（HBV）DNA，但不表达乙肝病毒基因组RNA。

培养条件：SNU-182人肝癌贴壁细胞系通常在RPMI-1640培养基中培养，并添加10%胎牛血清和1%双抗（青霉素和链霉素）。培养环境的气相为100%空气，温度为37℃，属于贴壁生长型细胞。

SNU-182人肝癌贴壁细胞系细胞形态和用途：SNU-182人肝癌贴壁细胞系呈上皮细胞样，形态较规则，具有一个清晰的核和胞质。该细胞系可用于研究肝癌的发生机制、细胞增殖和凋亡、药物筛选和新药开发等方面。

SNU-182人肝癌贴壁细胞系

SNU-182人肝癌贴壁细胞系培养步骤：

1）复苏SNU-182人肝癌贴壁细胞系细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）SNU-182人肝癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

3）SNU-182人肝癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。

应用^[4-5]

SNU-182人肝癌贴壁细胞系可以用于ZNF545在肝癌中的表观遗传学改变及功能的研究

探究ZNF545在肝癌中的表观遗传学改变及其生物学功能,为其在临床的应用和明确肝癌发病机制提供新的线索。

方法：九株肝癌细胞系(HBX344,SNU449,SMMC-7721,SNU-182人肝癌贴壁细胞系,SNU387,Huh7,HepG2,LM3及PLC-PRF-5)、一株永生化细胞系L02和62例原发性肝癌组织标本被用于本实验的研究。MSP技术、MTT实验、克隆形成、侵袭迁移实验、western-blot及流式细胞检测技术被应用于本研究中。

结果：ZNF545在肝癌细胞系SNU449、SMMC7721、L02、Huh7、HepG2以及LM3中表达缺失,其启动子区在这六株细胞系中呈完全甲基化;在细胞系SNU-182人肝癌贴壁细胞系和PLC-PRF-5中有少量表达,启动子区呈部分甲基化;在ZNF545高表达的细胞系HBX344和SNU387中,ZNF545的启动子区为非甲基化。在去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-AZA)诱导下,ZNF545在细胞系SNU449、SMMC7721、L02、Huh7、HepG2和LM3中恢复表达,在SNU-182人肝癌贴壁细胞系和PLC-PRF-5细胞系中表达量增加。而在HBXF344和SNU387中,加药前后ZNF545的表达量无明显改变。在肝癌细胞系中ZNF545的表达缺失或下降受到其启动子区甲基化的调控。ZNF545的启动子区在肝癌组织中频发甲基化,甲基化率为53.2%(33/62)。恢复表达ZNF545可明显抑制SNU449和Huh7细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞的凋亡。

结论：ZNF545在肝癌中频发甲基化。在肝癌细胞系中,ZNF545的表达受到启动子区甲基化的调控。ZNF545能够抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进细胞凋亡,在肝癌的发生和发展中可能发挥抑制作用。

参考文献

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