RAW 264.7 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞的应用

背景^[1-3]

RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞是一种广泛用于研究和培养巨噬细胞的细胞系。这种细胞系来源于小鼠的急性单核-巨噬细胞白血病肿瘤，被广泛应用于免疫学、炎症和肿瘤研究等领域。RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞是从Abelson小鼠白血病病毒（MuLV）诱导的肿瘤中建立的雄性小鼠巨噬细胞细胞系，Raschke等人于1976年首次报道了该细胞系。

在RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞中，巨噬细胞具有异质性，可以根据不同的激活方式分为经典激活的巨噬细胞M1和选择性激活的巨噬细胞M2。M1型分化是由细菌和脂多糖（LPS）诱导，产生促炎细胞因子，抵抗病原入侵，但也会造成机体损伤；而M2型分化则是由白细胞介素（IL-4）诱导，分泌抗炎细胞因子，并在组织修复与重建和肿瘤的形成过程中发挥作用。

RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞

在实验中，通常采用一定浓度的IFN-γ和LPS共同作用一段时间来诱导RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞向M1型分化，而采用IL-4作用则可诱导其向M2型分化。通过分析RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞表面CD86和CD206的表达，可以对其极化状态进行鉴定。同时，实时定量PCR和ELISA等方法也被用于分析RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞因子的表达及分泌。

RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞sIg-、Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞不分泌可检测到的病毒颗粒，XC斑点形成试验阴性。根据Janet W.Hartley博士在2008年发表的一项研究，RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞被证明表达生态性和多向性MuLV，并且使用XC噬斑试验对病毒复制呈阳性。RAW 264.7细胞可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖，并且可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。LPS或PPD处理2天可诱导RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞分解红血球，但对肿瘤靶细胞无作用。RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞易于繁殖，DNA转染效率高，对RNA干扰敏感，并支持小鼠诺如病毒的复制，可以用于3D细胞培养、免疫系统紊乱和免疫学研究，也是一种合适的转染宿主。

应用^[4-5]

RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞可以用于酿酒酵母β-葡聚糖对RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞氧化应激、炎症和凋亡的缓解作用及机制

巨噬细胞是先天免疫系统的高度可塑性细胞,参与多种病理进程,对许多毒性刺激诱导的氧化应激、炎症和凋亡具有高度的抗性。酿酒酵母β-葡聚糖已被证明是一种有效的免疫增强剂,课题组前期研究证实其可降低肉羊机体氧化应激。

利用LPS诱导RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞建立氧化应激和炎症反应模型,初步证实酿酒酵母β-葡聚糖的抗氧化作用。然后,在氧化应激模型基础上,探究酿酒酵母β-葡聚糖对RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞抗氧化、抗炎及抗凋亡的分子作用机制,为预防和治疗氧化应激相关性疾病提供新的思路。本研究主要从细胞信号通路转导方面对酿酒酵母β-葡聚糖抗氧化、抗炎和抗凋亡作用机制进行研究,结果如下:

(1) 试验一以LPS为诱导物,氧化应激和促炎细胞因子作为建立氧化应激和炎症模型指标,探究LPS对RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞氧化损伤效果。结果表明:0.1～5μg/m L LPS处理RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞12 h后,细胞内氧化应激指标MDA和ROS产生显著增多,抗氧化指标SOD、CAT和GSH-Px酶活性显著降低;细胞培养上清液中促炎细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α释放显著增多,细胞内COX-2和i NOS含量显著升高。综合多项指标,以1μg/m L LPS作为建立细胞氧化应激和炎症模型的最佳浓度。

(2) 试验二在试验一基础上,初步探讨酿酒酵母β-葡聚糖对LPS诱导的RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞氧化应激和炎症损伤的缓解作用。结果表明:酿酒酵母β-葡聚糖增强抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px和HO活性,抑制LPS诱导的MDA和ROS产生而发挥抗氧化作用,降低IL-1β、IL-6和TNF-α的释放以及COX-2和i NOS水平而起到抗炎效果,推测可能是酿酒酵母β-葡聚糖激活抗氧化转录因子从而发挥预保护作用。这些结果充分说明β-葡聚糖具有抗氧化和抗炎的双重调节作用,从而抑制细胞内ROS产生,进而对RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞起到保护作用。但其调控抗氧化和抗炎信号转导机制仍需在氧化应激模型中进一步验证。

(3) 试验三以试验二为基础进行深入性研究,本试验旨在探讨β-葡聚糖抑制LPS诱导的RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞氧化应激分子机制。为阐明β-葡聚糖抗氧化的分子机制,我们设计了β-葡聚糖添加试验,结果表明:β-葡聚糖能够激活其受体Dectin-1介导的Nrf2/HO-1信号转导通路。氧化应激模型中,在LPS抑制Nrf2和HO-1表达的条件下,β-葡聚糖能显著上调LPS诱导的Dectin-1、Nrf2和HO-1的表达,抑制ROS产生,但β-葡聚糖这些作用可被Dectin-1抑制剂Laminarin、Nrf2抑制剂ML385和HO-1抑制剂Sn PP逆转。该结果表明β-葡聚糖可以通过Dectin-1/Nrf2/HO-1信号通路抑制LPS诱导的RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞氧化应激。

参考文献

[1]Protective Effects of Ginsenosides(20R)-Rg3 on H2 O2-Induced Myocardial Cell Injury by Activating Keap-1/Nrf2/HO-1 Signaling Pathway..Zhao Yan;Wang Yu;Zhang Min;Gao Yugang;Yan Zhaowei.Chemistry&biodiversity,2021

[2]Polygonatum sibiricum polysaccharide inhibits high glucose-induced oxidative stress,inflammatory response,and apoptosis in RPE cells..Wang Wenjun;Li Shang;Song Meixia.Journal of receptor and signal transduction research,2021

[3]Cryptochlorogenic acid attenuates LPS-induced inflammatory response and oxidative stress via upregulation of the Nrf2/HO-1 signaling pathway in RAW 264.7 macrophages.Xue-Lian Zhao;;Liang Yu;;Sun-Dong Zhang;;Kou Ping;;Hai-Yan Ni;;Xiang-Yu Qin;;Chun-Jian Zhao;;Wei Wang;;Thomas Efferth;;Yu-Jie Fu.International Immunopharmacology,2020

[4]Potential Applications of NRF2 Modulators in Cancer Therapy.Emiliano Panieri;;Aleksandra Buha;;Pelin Telkoparan-Akillilar;;Dilek Cevik;;Demetrios Kouretas;;Aristidis Veskoukis;;Zoi Skaperda;;Aristidis Tsatsakis;;David Wallace;;Sibel Suzen;;Luciano Saso.Antioxidants,2020

[5]于春微.酿酒酵母β-葡聚糖对RAW264.7细胞氧化应激、炎症和凋亡的缓解作用及机制[D].内蒙古农业大学,2022.