HTERT RPE-1细胞系|人视网膜色素上皮细胞的应用

背景^[1-3]

HTERT RPE-1细胞系|人视网膜色素上皮细胞是一种在实验室中用于研究的细胞系，主要来源于人视网膜色素上皮细胞。

HTERT(Human Telomerase Reverse Transcriptase，人端粒酶逆转录酶)是一种在细胞分裂过程中起重要作用的酶，它的主要功能是帮助维持染色体的稳定性，防止染色体的缩短和端粒的消失。在正常细胞中，随着细胞分裂次数的增加，端粒会逐渐缩短，当端粒缩短到一定程度时，细胞就会停止分裂。而在某些类型的癌症细胞中，HTERT被过度表达，使得细胞能够逃避这种生长限制，继续无限制地分裂。

HTERT RPE-1细胞系|人视网膜色素上皮细胞是一种来源于人视网膜色素上皮细胞的细胞系，这种细胞在实验室中常用于研究视网膜疾病、眼部肿瘤等。

HTERT RPE-1细胞系|人视网膜色素上皮细胞

HTERT RPE-1细胞系|人视网膜色素上皮细胞培养步骤：

1）复苏HTERT RPE-1细胞系|人视网膜色素上皮细胞细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）HTERT RPE-1细胞系|人视网膜色素上皮细胞细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

3）HTERT RPE-1细胞系|人视网膜色素上皮细胞细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。

应用^[4-5]

HTERT RPE-1细胞系|人视网膜色素上皮细胞可以用于谷胱甘肽在微波辐射致hTERT-RPE1细胞基因转录中的作用

对HTERT RPE-1细胞系|人视网膜色素上皮细胞细胞和添加5 0μmol·L-1谷胱甘肽(GSH)培养2 4h后的hTERT RPE1细胞进行2 4 5 0MHz,1 0mW·cm-2的微波辐射,并就有关细胞应激和凋亡基因的转录水平进行比较研究。

方法:应用基因芯片技术对微波辐射hTERT RPE1细胞和添加GSH(5 0μmol·L-1,2 4h)的HTERT RPE-1细胞系|人视网膜色素上皮细胞的mRNA进行检测.结果:在97条有关应激和凋亡的目的基因中发现:与未添加GSH的HTERT RPE-1细胞系|人视网膜色素上皮细胞细胞相比,添加GSH的细胞有1 1条基因转录下调,其中与应激相关的基因M 31 1 6 6表现出明显下调(1 1倍),与细胞增殖相关的基因AB0 1 4 5 0 9,AF 0 5 36 4 1,NM 0 1 2 1 77,AF 0 0 1 4 97和AF 1 1 7386转录下调,与细胞蛋白质翻译、折叠和加工有关的基因NM 0 0 1 4 1 8,AJ2 5 0 91 5及U36 336转录下调,与细胞内信号传导代谢有关的基因U32 5 1 9,AF 1 1 7386等转录下调;只有基因W5 2 72 1转录上调。

结论:GSH(5 0μmol·L-1,2 4h)可显著降低HTERT RPE-1细胞系|人视网膜色素上皮细胞急性期反应蛋白转录,使细胞蛋白质合成、翻译和细胞生长增殖等基因转录下调,并同时使调节信号通道和周期蛋白丰度的相关基因转录下调。

参考文献

[1] Genetic evidence for interactions between yeast importinα(Srp1p)and its nuclear export receptor,Cse1p.A.J.Schroeder;;X.-H.Chen;;Z.Xiao;;M.Fitzgerald-Hayes.MGG-Molecular and General Genetics,1999

[2] Telomerase as an emerging target to fight cancer—Opportunities and challenges for nanomedicine.C.Philippi;;B.Loretz;;U.F.Schaefer;;C.M.Lehr.Journal of Controlled Release,2010

[3] Telomerase Maintains Telomere Structure in Normal Human Cells.Kenkichi Masutomi;;Evan Y.Yu;;Shilagardy Khurts;;Ittai Ben-Porath;;Jennifer L.Currier;;Geoffrey B.Metz;;Mary W.Brooks;;Shuichi Kaneko;;Seishi Murakami;;James A.DeCaprio;;Robert A.Weinberg;;Sheila A.Stewart;;William C.Hahn.Cell,2003

[4] Demethylation of the human telomerase catalytic subunit(hTERT)gene promoter reduced hTERT expression and telomerase activity and shortened telomeres.Isabelle Guilleret;;Jean Benhattar.Experimental Cell Research,2003

[5]刘秀红,申洪,史永亮等.谷胱甘肽在微波辐射致hTERT-RPE1细胞基因转录中的作用[J].第四军医大学学报,2003(15):1345-1348.