HS 294T人黑色素瘤贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

HS 294T人黑色素瘤贴壁细胞系是一种来源于人黑色素瘤的细胞系，通常用于研究肿瘤细胞生物学、药物筛选和抗肿瘤药物开发等。这种细胞系具有贴壁生长的特性，需要特定的培养条件和操作规程以确保其生长和繁殖。

HS 294T人黑色素瘤贴壁细胞系的保存和运输需遵循一定的低温避光条件，以保证细胞的活性和稳定性。同时，使用这种细胞系进行实验时，需注意以下几点：

HS 294T人黑色素瘤贴壁细胞系培养条件：该细胞系需要在含有一定浓度的血清、抗生素和生长因子的培养基中生长，同时需控制温度、湿度和二氧化碳浓度等条件。

HS 294T人黑色素瘤贴壁细胞系传代方法：HS 294T人黑色素瘤贴壁细胞系的传代方法通常采用胰酶消化法或胶原酶消化法，传代比例根据实验需求进行适当调整。

HS 294T人黑色素瘤贴壁细胞系细胞形态：HS 294T人黑色素瘤贴壁细胞系的形态通常为贴壁生长，呈现圆形或卵圆形，有时可见细胞之间形成突起或形成细胞团。

HS 294T人黑色素瘤贴壁细胞系

HS 294T人黑色素瘤贴壁细胞系培养步骤：

1）复苏HS 294T人黑色素瘤贴壁细胞系细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）HS 294T人黑色素瘤贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

3）HS 294T人黑色素瘤贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。

应用^[4-5]

HS 294T人黑色素瘤贴壁细胞系可以用于黑素瘤细胞及表皮黑素细胞中酪氨酸激酶c-abl,c-kit和PDGFRα/β的表达

观察酪氨酸激酶在多株黑素瘤细胞系及原代表皮黑素细胞中的表达,探讨酪氨酸激酶在黑素瘤发生发展过程中的作用。

方法：分离并培养人原代表皮黑素细胞,培养浅表垂直生长期黑素瘤细胞株WM793B,转移性黑素瘤细胞株A2058,WM-266-4,HS 294T人黑色素瘤贴壁细胞系,SK-MEL-5和SK-MEL-1,用RT-PCR法分别检测7株细胞中酪氨酸激酶c-abl,c-kit和PDGFRα/βmRNA的表达;Western-blot法检测7组细胞中非受体性酪氨酸激酶c-abl蛋白水平的表达。

结果：与表皮黑素细胞和WM793B细胞相比,5株转移性黑素瘤细胞中的c-ablmRNA及其蛋白水平的表达偏高;而PDGFRα/βmRNA表达明显偏低、c-kitmR-NA在表皮黑素细胞,A2058,WM-266-4和HS 294T人黑色素瘤贴壁细胞系中mRNA表达较高,而在WM793B,SK-MEL-5和SK-MEL-1中偏弱。结论酪氨酸激酶c-abl对黑素瘤的发生发展可能有促进作用,而PDGFRα/βmRNA的低表达可能与黑素瘤的转移有关。

参考文献

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[5]刘启方,周晓燕,廖文俊等.黑素瘤细胞及表皮黑素细胞中酪氨酸激酶c-abl,c-kit和PDGFRα/β的表达[J].中国皮肤性病学杂志,2011,25(07):511-514.