KYSE50细胞系|低分化人食管鳞癌细胞的应用

背景^[1-3]

KYSE50细胞系|低分化人食管鳞癌细胞是一种低分化的人食管鳞癌细胞，通常用于研究食管癌的生物学特性、药物筛选和抗肿瘤药物开发等。这种细胞系具有一些特殊的生物学特性，如高度侵袭性、易转移等，为食管癌的研究提供了重要的实验模型。

KYSE50细胞系|低分化人食管鳞癌细胞的保存和运输需遵循一定的低温避光条件，以保证细胞的活性和稳定性。同时，使用这种细胞系进行实验时，需注意以下几点：

KYSE50细胞系|低分化人食管鳞癌细胞培养条件：该细胞系需要在含有一定浓度的血清、抗生素和生长因子的培养基中生长，同时需控制温度、湿度和二氧化碳浓度等条件。

KYSE50细胞系|低分化人食管鳞癌细胞传代方法：KYSE50细胞系的传代方法通常采用胰酶消化法或胶原酶消化法，传代比例根据实验需求进行适当调整。

KYSE50细胞系|低分化人食管鳞癌细胞细胞形态：KYSE50细胞系的形态通常为贴壁生长，呈现圆形或卵圆形，有时可见细胞之间形成突起或形成细胞团。

KYSE50细胞系|低分化人食管鳞癌细胞

KYSE50细胞系|低分化人食管鳞癌细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备基础培养基(GIBCO，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸钠0.11g/L)；优质胎牛血清，10%。

2）KYSE50细胞系|低分化人食管鳞癌细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）KYSE50细胞系|低分化人食管鳞癌细胞冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二．KYSE50细胞系|低分化人食管鳞癌细胞细胞处理：

1）复苏KYSE50细胞系|低分化人食管鳞癌细胞细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）KYSE50细胞系|低分化人食管鳞癌细胞细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）KYSE50细胞系|低分化人食管鳞癌细胞细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

应用^[4-5]

KYSE50细胞系|低分化人食管鳞癌细胞可以用于lncRNA MEG3在p53介导的食管鳞癌细胞增殖和凋亡中的作用

探究lncRNA MEG3在p53介导的食管鳞癌细胞增殖和凋亡中的作用及机制。

方法qPCR检测食管鳞癌患者癌组织、癌旁组织及细胞系中lncRNA MEG3的表达。CCK-8法检测敲低或过表达lncRNA MEG3后Eca-109、TE-1细胞的增殖能力，流式细胞术检测Eca-109、TE-1细胞凋亡。采用RNA免疫沉淀检测lncRNA MEG3与p53相互作用。qPCR检测p53、p21、Bax的mRNA表达，Western blotting检测p53、Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3、Cyto-C蛋白表达，双荧光素酶报告基因检测p53的转录调节能力。

结果：lncRNA MEG3在食管鳞癌患者及细胞系Eca-109、TE-1、KYSE50细胞系|低分化人食管鳞癌细胞中均低表达。高表达lncRNA MEG3的患者拥有更长的总生存期，在Eca-109和TE-1细胞中敲低lncRNA MEG3,可促进细胞增殖，抑制p53死亡信号通路相关蛋白Bax、Cleaved-Caspase3、Cyto-C蛋白表达，促进Bcl-2表达；过表达lncRNA MEG3则抑制细胞增殖，上调p53转录活性，促进Bax、Cleaved-Caspase3、Cyto-C、p21蛋白表达，同时抑制Bcl-2表达，促进细胞凋亡。结论在食管鳞癌细胞中，lncRNA MEG3与p53蛋白直接结合，从而促进p53的转录调节能力，激活p53下游基因转录，抑制细胞增殖，并促进细胞凋亡。

参考文献

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