FTC-133 人甲状腺癌细胞系的应用

背景^[1-3]

FTC-133人甲状腺癌细胞系 是一种由扁平多边形变为梭形的甲状腺癌细胞系。这些细胞保留了分化的甲状腺细胞功能和甲状腺细胞对甲状腺素和局部活性生长因子的反应。此外，甲状腺球蛋白免疫反应也可见于这种细胞系。

FTC-133人甲状腺癌细胞系 是一种来源于人甲状腺癌的肿瘤细胞系。这种细胞系已经被广泛应用于甲状腺癌的研究中，包括肿瘤发生机制、药物筛选和治疗等方面。

FTC-133人甲状腺癌细胞系通常通过将人甲状腺癌组织中的肿瘤细胞分离出来，经过体外培养和传代，最终得到稳定的细胞系。这些细胞具有多向分化潜能，可以分化为甲状腺上皮细胞、滤泡细胞和髓样细胞等不同类型的细胞。

由于FTC-133人甲状腺癌细胞系具有高度的增殖能力和分化能力，因此被广泛应用于甲状腺癌的研究中。

FTC-133人甲状腺癌细胞系 

FTC-133人甲状腺癌细胞系培养步骤：

1）复苏FTC-133人甲状腺癌细胞系细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）FTC-133人甲状腺癌细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打FTC-133人甲状腺癌细胞系细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将FTC-133人甲状腺癌细胞系细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

3）FTC-133人甲状腺癌细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。

应用^[4-5]

FTC-133人甲状腺癌细胞系可以用于SLC27A2/FATP2在分化型甲状腺癌增殖和迁移中的作用及机制研究

探讨DUSP5介导FTC-133人甲状腺癌细胞系迁移增殖作用人甲状腺滤泡癌细胞系(FTC-133)分为以下4组:A:DUSP5过表达质粒转染FTC-133(DUSP5);B:空载对照质粒转染FTC-133(NC);C:DUSP5小干扰转染FTC-133(siDUSP5);D:空载对照小干扰转染FTC-133(siNC)。western blotting和qRT-PCR检测DUSP5的干预效果。根据Transwell检测细胞迁移、侵袭能力,EdU检测细胞增殖能力,western blotting检测迁移相关蛋白分子的表达情况。

KEGG富集分析明确FTC与PTC差异基因所富集关键通路并进行体外验证进一步通过对三个数据集差异表达基因进行KEGG富集分析发现,MAPK信号通路在三个数据集中均富集显著,提示我们MAPK信号通路在介导FTC与PTC生物学行为差异方面发挥重要作用。我们分别应用MAPK信号通路中三个亚通路的抑制剂以Edu、Transwell验证三个亚通路(ERK MAPK,JNK,p3 8 MAPK)在FTC细胞中发挥的作用。进一步以western blotting检测干预DUSP5的表达后MAPK信号通路的三个亚通路的激活情况,随后Edu、Transwell明确DUSP5与其激活的MAPK亚通路对FTC-133人甲状腺癌细胞系细胞增殖、迁移以及侵袭的影响。

统计学分析统计学分析:数据以均数±标准差(mean±SE)表示,使用SPSS 22.0统计软件进行统计分析,两组间数据的比较使用非配对t检验。若P<0.05,则认为有统计学意义(双侧),若P<0.01,则认为有显著统计学意义(双侧)。

研究结果1.数据库综合分析结果:GEO数据库筛选发现GSE27155,GSE53157和GSE29315三个数据集符合纳入标准,共包含26个FTC样本,67个PTC样本,经GEO2R工具进行差异表达基因分析并以Venn进行汇总(图1.2),发现有26个基因(见表1)在这三个数据库中均差异表达。这26个差异表达基因中有2个在FTC中表达上调,24个表达下调(图1.3)。对26个共同差异表达基因以cBioPartol数据库中甲状腺癌病人的临床资料进行生存相关分析,我们发现这26个共同差异表达基因中DUSP5对于甲状腺癌的生存率有明显的影响(图1.4)。

2. 验证病理组织DUSP5的表达情况:免疫组化结果显示,在FTC病理组织中DUSP5表达较少,而PTC病理组织中DUSP5大量表达(P<0.05)。在组织芯片中也得到相同的结果(P<0.05)。

3.细胞转染DUSP5:转染DUSP5过表达质粒、小干扰以及对应空白对照于FTC-133人甲状腺癌细胞系细胞,western blottingting、RT-PCR验证转染效果,结果显示:与空载对照质粒组相比,过表达质粒组DUSP5在蛋白水平和mRNA水平均表达增加(P<0.05),小干扰与对照组相比DUSP5表达降低(图3.1)(P<0.05)。

参考文献

[1]Ghrelin promotes human non-small cell lung cancer A549 cell proliferation through PI3K/Akt/mTOR/P70S6K and ERK signaling pathways.Jianhua Zhu;;Jianfeng Yao;;Rongfu Huang;;Yueqin Wang;;Min Jia;;Yan Huang.Biochemical and Biophysical Research Communicatio,2018

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[3]Prognostic markers in well differentiated papillary and follicular thyroid cancer(WDTC).S.L.Gillanders;;J.P.O'Neill.European Journal of Surgical Oncology,2018

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[5]张倩.DUSP5介导甲状腺滤泡癌恶性生物学行为及相关机制研究[D].山东大学,2021.