DNA甲基化修饰试剂盒

背景^[1-7]

DNA甲基化修饰试剂盒作为新一代的亚硫酸氢盐转换工具，BisulFlash DNA修饰试剂盒提供了化的缓冲液配方和试剂，能对DNA样品进行超快速的亚硫酸氢盐转换处理。利用试剂盒中即时可用的转换混合溶液，能在整个实验中一直维持DNA的变性状态.作为本公司的专利溶液，它能使亚硫酸氢钠快速地地所有胞嘧啶转换为尿嘧啶。

混合溶液中含本公司特有的DNA保护剂，能阻止亚硫酸氢盐处理过程中DNA的化学和热降解.无毒的已修饰DNA俘获缓冲液能将DNA牢牢的结合在柱子的滤膜上，这样就能放心地洗涤DNA上的亚硫酸氢钠和盐离子.被修饰的DNA随后可以被洗脱下来，储存在-20℃两个月以上。

DNA甲基化修饰作为一种重要的表观遗传修饰,能通过影响染色质结构,DNA构象、稳定性以及与蛋白质相互作用方式等,起到调控基因表达的作用。在正常的生理条件以及一些疾病发生过程中均起着重要作用。DNA甲基化是一种常见的表观遗传修饰,由DNA甲基转移酶(DNA methyl-transferase,Dnmt)催化,以S-腺苷甲硫氨酸(SAM)作为甲基供体而发生反应。

催化反应有3类类型,包括将腺嘌呤转变为N-甲基腺嘌呤、将胞嘧啶转变为N-甲基胞嘧啶以及将胞嘧啶转变为C-甲基胞嘧啶。原核生物中这3种类型均存在,但是在高等真核生物中只存在第3种类型,即将胞嘧啶(C)转变为5-甲基胞嘧啶(5mC)。近些年来,表观遗传学领域发展迅速,相关研究方兴未艾。

其中一个非常重要的部分就是DNA甲基化修饰。目前通用的检测方案是利用亚硫酸盐修饰的方法。使用亚硫酸盐将未甲基化的胞嘧啶（C）转化为尿嘧啶（U），而甲基化的胞嘧啶不受任何影响。然后，再通过设计特异性的甲基化引物，进行MS-PCR扩增或者亚硫酸盐测序实验，从而达到检测单个基因甲基化水平的目的。

特点：

1. 生成甲基化阳性对照进行甲基化研究；

2. 包括酶促甲基化的人类基因组DNA和所有修饰元件；

3. 敏感性高，待测DNA中5-甲基胞嘧啶分布极不均衡也可检测。

4. 适用于各种样本类型。

5. 转化效率高，在3小时内完成富含GC的DNA的完全转化。

6. 独特的保护剂限度地避免DNA降解，保障了后续的检测实验的需求。

7. 优化的缓冲液体系能限度的提高处理后的DNA回收效率。

应用^[8]

DNA甲基化修饰试剂盒可用于DNA甲基化相关疾病的诊断：

针对肿瘤表观遗传学机制研究的最终目的是为了应用于临床诊断及预防治疗。DNA甲基化和MicroRNA在诊断方面的研究已经趋于成熟,Fujiwara等研究表明5个基因血清游离DNA甲基化谱在诊断早期肺癌方面特异性和阳性预测值分别为85%和75%,同样众多研究表明MicroRNA表达谱可应用于乳腺癌的病理分型(如雌孕激素受体状态、肿瘤分期、肿瘤转移及Her2状态等)。

参考文献

[1]Mediator complex subunit 12 exon 2 mutation analysis in different subtypes of smooth muscle tumors confirms genetic heterogeneity[J].Marieke A.de Graaff,Anne-Marie Cleton-Jansen,Károly Szuhai,Judith V.M.G.Bovée.Human Pathology.2013(8)

[2]Atypical Leiomyomas of the Uterus:A Clinicopathologic Study of 51 Cases[J].Amy Ly,Anne M.Mills,Jesse K.McKenney,Bonnie L.Balzer,Richard L.Kempson,Michael R.Hendrickson,Teri A.Longacre.The American Journal of Surgical Pathology.2013(5)

[3]Prevalence of MED 12 mutations in uterine and extrauterine smooth muscle tumours[J].Akiko Matsubara,Shigeki Sekine,Masayuki Yoshida,Akihiko Yoshida,Hirokazu Taniguchi,Ryoji Kushima,Hitoshi Tsuda,Yae Kanai.Histopathology.2013(4)

[4]Runx3 Protects Gastric Epithelial Cells Against Epithelial‐Mesenchymal Transition‐Induced Cellular Plasticity and Tumorigenicity[J].Dominic Chih‐Cheng Voon,Huajing Wang,Jason Kin Wai Koo,Tu Anh Pham Nguyen,Yit Teng Hor,Yeh‐Shiu Chu,Kosei Ito,Hiroshi Fukamachi,Shing Leng Chan,Jean Paul Thiery,Yoshiaki Ito.STEM CELLS.2012(10)

[5]Cancer statistics for Hispanics/Latinos,2012[J].Rebecca Siegel,Deepa Naishadham,Ahmedin Jemal.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2012(5)

[6]Mutational analysis of MED12 exon 2 in uterine leiomyoma and other common tumors[J].Eun Mi Je,Mee Ran Kim,Ki Ouk Min,Nam Jin Yoo,Sug Hyung Lee.Int.J.Cancer.2012(6)

[7]Prognostic role of methylated free circulating DNA in colorectal cancer[J].Alexander B.Philipp,Petra Stieber,Dorothea Nagel,Jens Neumann,Fritz Spelsberg,Andreas Jung,Rolf Lamerz,Andreas Herbst,Frank T.Kolligs.Int.J.Cancer.2012(10)

[8]张青.表观遗传学修饰在妇科肿瘤诊断中的应用价值研究[D].山东大学,2014.