B16BL6细胞系|小鼠黑色素瘤细胞的应用

背景^[1-3]

B16BL6细胞系|小鼠黑色素瘤细胞是小鼠黑色素瘤细胞，是一种常用于黑色素瘤研究的细胞系。

黑色素瘤是一种高度恶性的肿瘤，起源于黑色素细胞。小鼠黑色素瘤细胞系B16BL6在实验研究中被广泛用于黑色素瘤的模型建立和治疗研究。这种细胞系具有侵袭性和转移性，能够形成黑色素瘤，并且可以通过免疫缺陷小鼠进行接种。

有关B16BL6细胞系的研究已经涉及到各种不同的领域，包括黑色素瘤的发病机制、肿瘤免疫、药物筛选等。通过研究B16BL6细胞系，科学家们可以深入探讨黑色素瘤的发生和发展机制，为临床治疗提供理论依据。

B16BL6细胞系|小鼠黑色素瘤细胞

B16BL6细胞系|小鼠黑色素瘤细胞培养操作

1)复苏B16BL6细胞系|小鼠黑色素瘤细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)B16BL6细胞系|小鼠黑色素瘤细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)B16BL6细胞系|小鼠黑色素瘤细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

B16BL6细胞系|小鼠黑色素瘤细胞可以用于山豆根对小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6生长、增殖的影响

研究山豆根对小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6生长、增殖的影响。

方法：培养小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6并随机分为对照组和处理组,对照组用不含药物的RMPI1640培养基进行处理,处理组分别采用含有400μg/ml、500μg/ml、600μg/ml、700μg/ml、800μg/ml山豆根提取物的RMPI1640培养基进行处理。采用细胞增殖抑制实验、黏附实验、侵袭重组基底膜实验、趋化性运动实验观察山豆根提取物对B16BL6细胞系|小鼠黑色素瘤细胞增殖、黏附、侵袭和转移的影响。

结果：山豆根提取物终浓度为700、800μg/ml时,B16BL6细胞系|小鼠黑色素瘤细胞增殖生长OD值明显低于对照组(t=2.526,4.371,P<0.05);山豆根提取物终浓度为500、600、700、800μg/ml时,黏附能力OD值明显低于对照组(t=4.856,8.515,8.926,12.357,P<0.05),侵袭细胞数明显低于对照组(t=4.661,9.824,12.460,16.300,P<0.05),趋化性运动细胞数明显低于对照组(t=2.698,3.906,6.012,7.974,P<0.05)。

结论：山豆根具有抑制B16BL6细胞系|小鼠黑色素瘤细胞增殖、黏附、侵袭和转移的能力,且与药物剂量呈依赖性关系。

参考文献

[1]Differential effect of amino acids on nitrate uptake and reduction systems in barley roots.Muhammad Aslam;;Robert L Travis;;D.William Rains.Plant Science,2001

[2]Tumor extent of slowly progressive oligodendroglioma determined by 18 F-fluorophenylalanine positron emission tomography.Katsuyoshi Mineura;;Hitoshi Shioya;;Masayoshi Kowada;;Kazuo Uemura.European Journal of Radiology,1997

[3]Antitumor activity of titanocene amino acid complexes.Petra K?pf-Maier;I.C.Tornieporth-Oetting.BioMetals,1996

[4]Para-Phenylenediamine Induces Apoptotic Death of Melanoma Cells and Reduces Melanoma Tumour Growth in Mice.Bhowmick Debajit;Bhar Kaushik;Mallick Sanjaya K.;Das Subhadip;Chatterjee Nabanita;Sarkar Tuhin Subhra;Chakrabarti Rajarshi;Das Saha Krishna;Siddhanta Anirban.Biochemistry Research International,2016.

[5]李俊兰,张东兴,刘诗.山豆根对小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6生长、增殖的影响[J].光明中医,2017.