TRAP试剂盒

背景^[1-7]

TRAP试剂盒(tagged RNA affinity purification)是一种检测与RNA结合的蛋白质（RBPs）或RNA的试剂盒。TRAP方法首先通过设计GST-MS2融合表达载体和ncRNA-MS2茎环结构串联重复载体，共转细胞获得GST-MS2融合蛋白和ncRNA-MS2融合RNA，在胞内形成GST-MS2~ncRNA-MS2与蛋白或RNA的复合体，最后裂解细胞，利用谷胱甘肽亲和琼脂糖珠子进行拉取，获得目的蛋白-RNA复合物，进一步分离纯化获得目的蛋白或目的RNA进行下一步检测分析。

抗酒石酸酸性磷酸酶主要存在于正常人肺泡巨噬细胞等部位的TRAP和存在于细胞白血病人脾脏TRAP均在细胞滤泡中，并不释放入血液，血液中TRAP绝大部分来源于破骨细胞。因而测量血液中TRAP可以了解破骨细胞的功能状态。在碱性的缓冲液中，细胞内酸酸性磷酸酶催化底物水解，其生成物进而与一种稳定的重氮盐偶联，生成不溶性的偶氮染料沉淀，当底物中存在酒石酸时，该反应只出现在特异性细胞中。

产品特点:

1、使用方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。

2、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

3、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

注意事项：

1．TRAP检测试剂盒（多种属）实验操作简便检测前，检查各种仪器，打开酶标仪，稳定20分钟左右。

2．检测样本要澄清，不能含杂物，否则会直接影响结果。

3．实验开始前要将试剂盒取出，室温放置30-40分钟，使各种试剂都恢复到室温，以使检测结果更为稳定。

4．尽量做双标准实验，这样可以保证数据的准确性。

5．底物具有毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，要避免接触。

6．TRAP检测试剂盒（多种属）实验操作简便实验中，要使底物避光保存，酶标板均可拆卸，多余的部分应密封好，低温保存。

结果判断与分析：

1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的待测物质标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的待测物质含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

TRAP试剂盒（多种种属）优点：

1．简单操作、、灵敏度高、特异强；

2．稳定的重复性和可靠性，板内、板间变异系数均小于12%；

3．吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；

4．TRAP试剂盒（多种种属）实验稳定性高，结果稳定；

应用^[8]

TRAP试剂盒可用于大肠杆菌表面展示Lpp’OmpA-TRAP融合蛋白及其免疫原性的实验

利用大肠杆菌Lpp’OmpA来表面展示S.aureus的TRAP蛋白,并研究其免疫原性,为探索新型奶牛乳房炎S.aureus疫苗提供参考。将重组大肠杆菌XL1-Blue/pLO、XL1-Blue/pLO-TRAP和TRAP蛋白用弗氏佐剂乳化后,分别免疫接种ICR小鼠,免疫后不同时间采取血清检测TRAP特异性抗体水平和抗体亚类;利用ELISPOT检测IL-4和IFN-γ、间接ELISA方法IL-17A;然后分别用S.aureus Newman和HLJ23-1菌株对免疫小鼠进行攻毒。在采取血清检测TRAP特异性抗体水平和抗体亚类时需要TRAP试剂盒。

参考文献

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[2]Invited review:Effect of udder health management practices on herd somatic cell count[J].S.Dufour,A.Fréchette,H.W.Barkema,A.Mussell,D.T.Scholl.Journal of Dairy Science.2011(2)

[3]Construction of a novel cell-surface display system for heterologous gene expression in Escherichia coli by using an outer membrane protein of Zymomonas mobilis as anchor motif[J].Ming-xiong He,Hong Feng,Yi-zheng Zhang.Biotechnology Letters.2008(12)

[4]Effects of Housing,Management,and Health of Dairy Heifers on First-Lactation Udder Health in Southwest Sweden[J].C.Svensson,A.-K.Nyman,K.Persson Waller,U.Emanuelson.Journal of Dairy Science.2006(6)

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[6]Adhesins and invasins of pathogenic bacteria:a structural view[J].Hartmut H.Niemann,Wolf-Dieter Schubert,Dirk W.Heinz.Microbes and Infection.2003(1)

[7]Microbial cell-surface display[J].Sang Yup Lee,Jong Hyun Choi,Zhaohui Xu.Trends in Biotechnology.2002(1)

[8]张建新.大肠杆菌表面展示Lpp’OmpA-TRAP融合蛋白及其免疫原性[D].黑龙江八一农垦大学,2013.