HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系是一种来源于人胎儿胸腺的细胞系，常被用于研究胸腺细胞的发育和分化。这种细胞系具有贴壁生长的特性，并能够支持T细胞的发育和成熟。

HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系在培养中呈现出上皮样形态，并表达多种与胸腺细胞发育相关的基因和表面标志物。这种细胞系可用于研究胸腺细胞的分化、成熟和功能，以及探索与胸腺细胞发育相关的疾病和治疗策略。

HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系

HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系细胞培养方法：

1、HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

应用^[4-5]

HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系可以用于CD34～+细胞体外诱导分化为T细胞的实验研究

利用脐带血分离出造血干／祖细胞，研究其在体外定向诱导分化为T淋巴细胞，从而证明造血干／祖细胞具有向T淋巴细胞分化的能力。并为研究T细胞生物学特性及细胞免疫提供技术平台。

应用MACS方法分离人脐带血CD34+细胞接种到人胎儿胸腺基质单层细胞上，IMDM液体培养基含20％人AB血清并加入FL、IL～12、IL-7和IL-2细胞因子组合，于培养7、14、21、28、35、42天取非贴壁细胞用PBS洗两遍，利用流式细胞仪对细胞免疫表型进行检测。培养4周后的T淋巴细胞进行PHA、IL-2非特异性抗原刺激，瑞士染色观察细胞形态。培养5周后的T淋巴细胞进行肿瘤细胞杀伤实验。

结果：2周后，CD4+CD8+非成熟T淋巴细胞占细胞总数的0.3％～13.3％，4～5周CD4+CD8+T淋巴细胞达到高峰占16.6％～26.5％，且CD3+CD4+CD8-和CD3+CD4-CD8+T淋巴细胞逐渐增多，6周后达26.5％～64.9％和11.6％～38.9％。培养成熟的T淋巴细胞经PHA+IL-2刺激后细胞数量增多至3～5倍，瑞氏染色鉴定可见大原始淋巴细胞存在，T细胞转化为淋巴母细胞，细胞内可见核仁，部分细胞出现有丝分裂现象。培养成熟的T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞K562杀伤率570nm和490nm的光密度(OD)分别为19.44％和10％。

因此，利用人脐血CD34+细胞体外接种到HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系基质单层细胞上加FL、IL-12、IL-7和IL-2细胞因子组合条件下，可诱导分化出T淋巴细胞，并且培养的T细胞对有丝分裂素刺激有增殖反应以及具有杀伤肿瘤细胞的效应。从而为T细胞的基础免疫学研究及临床治疗需要提供了研究及应用素材。这项研究也证明了脐带血可以作为多潜能造血干／祖细胞的替代源，具有向T淋巴细胞分化的能力，对扩大基因治疗和移植研究范围具有深远意义。

参考文献

[1]Human CD34+HLA-R-bone marrow cells contain progenitor cells capable of self-renewal,multilineage differentiation,and long-term in vitro hematopoiesis.Srour EF,Brandt JE,Briddell RA,et al.Blood cells.1991

[2]The thymus gland.Askin DF,Young S.Neonatal Netw.2001

[3]Mesenchymal stem cells suppress allogeneic T cell responses by secretion of TGF-betal.Chen JL;Guo ZK;Xu C,et al.Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi.2002

[4]The human thymus during aging.Barton F.Haynes;Gregory D.Sempowski;Alvin F.Wells;Laura P.Hale.Immunologic Research,2000

[5]姚志娟.CD34～+细胞体外诱导分化为T细胞的实验研究[D].中国人民解放军军事医学科学院,2004.