QG-56人肺扁平上皮癌贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

QG-56人肺扁平上皮癌贴壁细胞系是一种来源于人肺鳞状细胞癌的细胞系，常被用于肺癌研究、药物筛选等。这种细胞系具有上皮细胞样的形态和贴壁生长的特性，可用于体外培养和实验研究。

QG-56人肺扁平上皮癌贴壁细胞系的保存条件为低温避光，适宜在含10%-15%FBS的DMEM培养基中生长。该细胞系可促进对肺癌细胞的了解，对癌症的治疗和新药研发有一定的帮助。

QG-56人肺扁平上皮癌贴壁细胞系

QG-56人肺扁平上皮癌贴壁细胞系培养步骤：

1）复苏QG-56人肺扁平上皮癌贴壁细胞系细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）QG-56人肺扁平上皮癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

3）QG-56人肺扁平上皮癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。

应用^[4-5]

QG-56人肺扁平上皮癌贴壁细胞系可以用于汉黄芩素对人肺鳞癌细胞QG56的增殖抑制和诱导凋亡作用

研究汉黄芩素对人肺鳞癌QG56细胞增殖与凋亡的影响，探讨其对磷酸化胞外信号调节激酶（P-ERK1/2）的调控作用，进而探讨其可能通过的相关信号传导通路，为以p-ERK为靶点的药物的研究提供理论依据。

方法：用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定不同浓度汉黄芩素分别作用于肺鳞癌QG56细胞24、48和72小时后的细胞增殖活性，在相差倒置显微镜下观察细胞形态学变化，流式细胞仪AnnexinV-PI双标记法检测不同浓度汉黄芩素作用于肺鳞癌QG-56人肺扁平上皮癌贴壁细胞系细胞48小时后细胞凋亡情况，荧光显微镜下观察细胞凋亡形态并收集药物处理后的QG56细胞，通过Western blot法检测磷酸化胞外信号调节激酶（p-ERK1/2）在各药物处理组和对照组细胞中的蛋白表达。

结果：汉黄芩素（wogonin）可显著抑制肺鳞癌QG-56人肺扁平上皮癌贴壁细胞系细胞的生长，抑制率与药物浓度和作用时间成正相关，即汉黄芩素抑制细胞增殖作用呈浓度与时间依赖性，MTT结果显示各浓度组汉黄芩素对QG-56人肺扁平上皮癌贴壁细胞系细胞增殖有明显抑制作用，12.5μM汉黄芩素处理24h的抑制率为17.27%，当汉黄芩素浓度达到160μM时，对QG56的抑制率接近40.55%，分别用25、50、100和160μmol/L汉黄芩素处理24小时后三次实验测得各组抑制率分别为（20.51±1.32）%、（29.55±1.02）%、（32.56±0.51）%和（40.18±0.37）%，而24、48、72小时的半数抑制浓度（IC50值）分别为（63.45±7.02）μM、（52.60±8.09）和（38.37±7.82）μM。流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双标法检测证实了汉黄芩素能诱导QG56细胞凋亡,分别用25、50、100、160μmol/L汉黄芩素处理QG56细胞48小时后，凋亡率分别为20.79%、37.28%、50.88%和65.56%，当汉黄芩素浓度达到160μmol/L时，QG-56人肺扁平上皮癌贴壁细胞系细胞的最大凋亡率达到65.62%。

倒置显微镜下观察，加药前，细胞贴壁良好，呈多边形，大小适中，核仁清晰，细胞连接成片，加药后细胞形态不规则、贴壁不佳、染色质浓缩、细胞突起消失。

流式细胞术检测细胞凋亡：结果显示，细胞凋亡率随汉黄芩素浓度增加而增加，说明汉黄芩素可以明显诱导QG-56人肺扁平上皮癌贴壁细胞系细胞凋亡。荧光显微镜下观察，早期凋亡细胞呈绿色荧光，晚期凋亡呈红色荧光，Western blot检测磷酸化胞外信号调节激酶（p-ERK1/2）蛋白表达随药物浓度增大而明显下调，而阴性对照组P-ERK1/2蛋白水平无明显变化。表明汉黄芩素可以诱导肺癌细胞凋亡，RAF-MAPK-ERK可能是其作用的信号通路。

参考文献

[1]The ethanol extract of Scutellaria baicalensis and the active compounds induce cell cycle arrest and apoptosis including upregulation of p53 and Bax in human lung cancer cells.Jiayu Gao;;Winston A.Morgan;;Alberto Sanchez-Medina;;Olivia Corcoran.Toxicology and Applied Pharmacology,2011

[2]Inhibitory effects of wogonin on the invasion of human breast carcinoma cells by downregulating the expression and activity of matrix metalloproteinase-9.Pu Chen;;Na Lu;;Yun Ling;;Yan Chen;;Hui Hui;;Zhijian Lu;;Xiuming Song;;Zhiyu Li;;Qidong You;;Qinglong Guo.Toxicology,2011

[3]Wogonin potentiates the antitumor effects of low dose 5-fluorouracil against gastric cancer through induction of apoptosis by down-regulation of NF-kappaB and regulation of its metabolism.Qing Zhao;;Jia Wang;;Mei-Juan Zou;;Rong Hu;;Li Zhao;;Lei Qiang;;Jing-Jing Rong;;Qi-Dong You;;Qing-Long Guo.Toxicology Letters,2010

[4]Targeting apoptosis pathways in cancer by Chinese medicine.Min Li-Weber.Cancer Letters,2010

[5]申改玲.汉黄芩素对人肺鳞癌细胞QG56的增殖抑制和诱导凋亡作用[D].大连医科大学,2014.