NCI-H378细胞系|人小细胞肺癌细胞的应用

背景^[1-3]

NCI-H378细胞系|人小细胞肺癌细胞是一种来源于人类小细胞肺癌的贴壁细胞系。这些细胞具有贴壁生长的特点，即它们能够在培养皿或培养瓶中附着在固体表面上生长。

NCI-H378细胞系|人小细胞肺癌细胞已经被广泛应用于癌症研究中，特别是在小细胞肺癌的研究中。这些细胞系可以用于体外实验，以评估不同药物、治疗方法和基因对癌细胞的影响。此外，它们还可以用于研究肿瘤发生和发展的机制，以及寻找新的治疗靶点。

NCI-H378细胞系|人小细胞肺癌细胞

NCI-H378细胞系|人小细胞肺癌细胞培养方法：

1、NCI-H378细胞系|人小细胞肺癌细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、NCI-H378细胞系|人小细胞肺癌细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、NCI-H378细胞系|人小细胞肺癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

应用^[4-5]

NCI-H378细胞系|人小细胞肺癌细胞可以用于BCYRN1在小细胞肺癌增殖和转移中的作用及机制研究

分析鉴定SCLC细胞中BCYRN1(brain cytoplasmic RNA1,BCYRN1)的直接靶基因微小非编码RNA(micro RNA,mi RNA);分析BCYRN1/mi RNA对SCLC(small cell lung cancer,SCLC)细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。

方法1收集病理诊断为SCLC患者的血清(无远处转移20例,有远处转移10例)及健康受试者(10例)的血清。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time PCR,RT-q PCR)法分析三组血清中BCYRN1水平。

2RT-q PCR法检测肺癌细胞系(NCI-H460、NCI-H1299、NCI-SBC-2、NCI-H378细胞系|人小细胞肺癌细胞)和人支气管上皮样细胞系(16-HBE)中BCYRN1的表达。

3构建敲低BCYRN1的质粒psh RBCYRN1,将psh R-BCYRN1与作为阴性对照的p Silencer空质粒(p Silencer-negative control,p Silencer-NC)分别转染SCLC细胞系SBC-2。RT-q PCR验证对SBC-2细胞内源性BCYRN1的敲低效果。

4通过基因芯片技术筛选BCYRN1下游差异表达的mi RNA;通过双荧光素酶报告系统验证BCYRN1与mi RNA的靶向关系。

5通过平板克隆实验、无基质胶Transwell实验、有基质胶Transwell实验分析敲低BCYRN1对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;

6蛋白质印迹(Western blot)实验检测增殖指标Ki-67和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)关键蛋白(E-cadherin、Vimentin、Snail、Slug)的表达。

结果：1.无远处转移和有远处转移的SCLC患者血清中BCYRN1水平均显著高于健康受试者(P=0.00018;P=0.003),有远处转移与无远处转移患者间血清BCYRN1水平无显著性差异(P=0.089)。

2.四种细胞系内BCYRN1的表达差异有统计学意义(F=1096.81,P<0.001)。其中,三种肺癌细胞系中BCYRN1的表达均显著高于16-HBE细胞(NCI-H1299 vs 16-HBE:P=0.009;NCI-H460 vs 16-HBE:P=0.001;SBC-2 vs 16-HBE:P<0.001)。SCLC细胞系SBC-2中BCYRN1的表达水平高于大细胞肺癌细胞NCI-H460和肺腺癌细胞NCI-H1299(SBC-2 vs NCI-460:P<0.001;SBC-2 vs NCI-H1299:P<0.001)。

3.构建了psh R-BCYRN1质粒,酶切后电泳确认了插入片段的大小与已知的BCYRN1序列大小相符。转染psh R-BCYRN1组SBC-2细胞内BCYRN1水平显著低于转染p Silencer-NC组(t=12.87,P<0.001)。

参考文献

[1]Role of lncRNA LUCAT1 in cancer.Xing Ce;Sun Shou-gang;Yue Zhi-Quan;Bai Feng.Biomedicine&Pharmacotherapy,2021

[2]Biological functions of long noncoding RNAs and circular RNAs in small-cell lung cancer..Kumar Sachin;Pandey Monu;Sharawat Surender K.Epigenomics,2020

[3]The lncRNA PVT1 promotes invasive growth of lung adenocarcinoma cells by targeting miR-378c to regulate SLC2A1 expression.Hongwei Xia;Zhiqiang Zhang;Jun Yuan;Qingling Niu.Human Cell,2020

[4]LncRNA BC200 Promotes Esophageal Squamous Cell Cancer Migration and Invasion and Can Regulate ATF4 Expression..Zhao Ruihua;Cao Xinguang;Jin Shuiling;Li Rui;Zhong Qian;Jiang Miao;Han Jinming;Guo Changqing;Zong Hong.Frontiers in oncology,2020

[5]崔文韬.BCYRN1在小细胞肺癌增殖和转移中的作用及机制研究[D].华北理工大学,2022.