对重组TEV蛋白酶的介绍

背景及概述^[1]

蛋白酶是催化蛋白质水解的一类酶，是酶学研究中较早也是最深入的一种酶。重组TEV蛋白酶（GST标签）是烟草花叶病毒小核体蛋白a催化结构域基因编码的经高度纯化的制剂，该酶的生物学功能是在病毒产生过程中将多蛋白体酶解为单一蛋白。和因子Xa、凝血酶相比，TEV酶是识别序列更加严格。做为生物工程下游技术中融合蛋白酶切使用的重要工具酶，TEV酶识别非常一致的7氨基酸序列：E-Xaa-Xaa-Y -Xaa-Q-P1’(G/S)，酶切发生在Q和P1’之间的肽键。最常用的7氨基酸序列是ENLYFQG。P1’位置可以是不同的小分子氨基酸，这样目标蛋白从融合蛋白的N端释放，带自然的N末端或者只多一个氨基酸的蛋白。该产品是经过了基因工程改造的蛋白酶，稳定性好，在广泛的温度范围具有特异性。本品来源于重组大肠杆菌，经过高度纯化，比活性达到10,000U/mg。最适酶切温度是30℃，但在4℃也具有酶活性。rTEV-H带His标签，酶切后可方便地通过谷胱甘肽亲和柱层析去除。酶切的条件比如：温度、pH、DTT等可根据具体蛋白进行优化。  

纯度

经SDS-PAGE电泳分析，大于95％。

活性单位

一个酶活性单位定义为在4℃，pH8.0条件下，12~16小时在酶切反应缓冲液中将5μg融合蛋白95%酶切所需要的酶量。

推荐酶切条件

融合蛋白                                  0.1mg

重组TEV蛋白酶                           20U

10x酶切缓冲液                            10μl

温度（℃）                                      4

总体积                                       100μl

时间（小时）                          12~16

10x 酶切缓冲液

500 mM Tris-HCl, pH 8.0

5 mM EDTA

1% Tween-20 (v/v)

10 mM DTT

保存条件

-20℃保存活性保持２年以上。

主要参考资料

[1] 胡学智, & 王俊. (2008). 蛋白酶生产和应用的进展 (Doctoral dissertation).