DMS153细胞系|人肺癌细胞的应用

背景^[1-3]

DMS153细胞系|人肺癌细胞是人肺癌细胞，由O.S.Pettengill和G.D.Sorenson于1976年从一名44岁白人男性患者的小细胞肺癌肝脏组织中分离出来。该细胞系能分泌降血钙素、人降钙素基因相关肽及促肾上腺皮质激素等，并且在裸鼠及无胸腺小鼠中成瘤。

DMS153细胞系|人肺癌细胞在生物学特性上具有许多重要的特征，包括：

形态学特征：DMS153细胞呈多角形或长方形，有多个核，胞质丰富，呈现出典型的癌细胞形态。

生长特性：DMS153细胞具有快速增殖的能力，可以在体外持续培养并保持其生长特性。

分子特征：DMS153细胞表达多种肿瘤相关基因和蛋白质，如EGFR、ALK、KRAS等，这些分子标志物对于肺癌的研究和治疗具有重要意义。

药物敏感性：对多种化疗药物和靶向药物具有不同的敏感性，这为肺癌的治疗提供了重要的实验基础。

DMS153细胞系|人肺癌细胞是人肺癌细胞

DMS153细胞系|人肺癌细胞培养操作

1)复苏NCI-H647人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)DMS153细胞系|人肺癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3)DMS153细胞系|人肺癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

DMS153细胞系|人肺癌细胞可以用于PLK1抑制剂对小细胞肺癌的抑瘤作用及逆转化疗耐药的研究

BI 6727(volasertib)是PLK1高效的特异性小分子抑制剂,通过竞争性结合PLK1的ATP结合位点从而抑制其激酶活性。在临床前研究和临床试验中BI 6727单药治疗或联合其他药物,在多种肿瘤中表现出显著的抗肿瘤活性。然而,PLK1在小细胞肺癌中的表达以及PLK1抑制剂在小细胞肺癌中的作用及机制目前鲜有报道。

探索了PLK1抑制剂BI 6727在DMS153细胞系|人肺癌细胞中的抑瘤作用和逆转化疗耐药作用及机制。首先,通过免疫组化检测了PLK1在DMS153细胞系|人肺癌细胞中的表达并分析其与临床病理特征的联系;接着,采用CCK-8法、流式细胞分析、彗星实验、western blot等检测了BI 6727对小细胞肺癌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响及诱导DNA损伤的作用;并且在动物水平也验证BI 6727对小细胞肺癌移植瘤的作用;同时,通过构建顺铂耐药的小细胞肺癌细胞株,进一步探讨了PLK1在顺铂耐药的DMS153细胞系|人肺癌细胞中的作用,以及BI 6727逆转顺铂耐药的作用及机制。

在本研究中我们发现:PLK1在人小细胞肺癌中高表达,而在正常肺组织中几乎不表达,PLK1表达与患者临床分期以及预后相关。PLK1抑制剂BI 6727能够明显抑制小细胞肺癌细胞增殖,而正常支气管上皮细胞增殖不受影响。在体外条件下,BI 6727通过激活ATR/ATM-Chk1/Chk2诱导DNA损伤的发生,将小细胞肺癌细胞周期阻滞于G2/M期,并导致细胞发生caspase-3依赖性的细胞凋亡。在动物水平,BI 6727明显抑制裸鼠移植瘤的生长,并诱导肿瘤组织细胞DNA损伤和细胞凋亡。

在顺铂耐药小细胞肺癌细胞株中,PLK1表达增高,而沉默PLK1能够部分逆转顺铂耐药。并且,PLK1抑制剂BI 6727明显抑制耐药细胞的增殖,诱导耐药细胞发生DNA损伤,同时抑制DNA损伤修复蛋白Rad51的表达,并且能够诱导耐药细胞凋亡。

综上所述,PLK1在小细胞肺癌的发生发展及化疗耐药过程中发挥重要作用,PLK1可能成为小细胞肺癌治疗的重要靶点。

参考文献

[1]Effect of PLK1 inhibition on cisplatin‐resistant gastric cancer cells.Zihao Chen;;Yanling Chai;;Ting Zhao;;Ping Li;;Lihua Zhao;;Fang He;;Yu Lang;;Jing Qin;;Hongping Ju.Journal of Cellular Physiology,2019

[2]Global cancer statistics 2018:GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.Freddie Bray BSc,MSc,PhD;;Jacques Ferlay ME;;Isabelle Soerjomataram MD,MSc,PhD;;Rebecca L.Siegel MPH;;Lindsey A.Torre MSPH;;Ahmedin Jemal PhD,DVM.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2018

[3]Polo-like kinase 1 inhibitor BI 6727 induces DNA damage and exerts strong antitumor activity in small cell lung cancer.Yuehong Wang;;Linying Wu;;Yinan Yao;;Guohua Lu;;Liming Xu;;Jianying Zhou.Cancer Letters,2018

[4]Effects of PLK1 on proliferation,invasion and metastasis of gastriccancer cells through epithelial-mesenchymal transition.Rui Song;;Ge Hou;;Jun Yang;;Jinjin Yuan;;Cheng Wang;;Ting Chai;;Zongwen Liu.Oncology Letters,2018

[5]吴琳颖.PLK1抑制剂对小细胞肺癌的抑瘤作用及逆转化疗耐药的研究[D].浙江大学,2021.