IAR20细胞系|大鼠肝细胞的应用

背景^[1-3]

IAR20细胞系|大鼠肝细胞是一种大鼠肝细胞系，它是由一名患有肝癌的大鼠中分离出来的。这种细胞系在肿瘤学研究中具有重要价值，因为它可以用于评估新的治疗方法和药物的有效性，以及研究肝癌的发生和发展机制。

IAR20细胞系|大鼠肝细胞系通常被用于体外实验模型，例如细胞培养、基因转染、蛋白质表达等技术。研究人员可以通过改变培养条件、添加生长因子或使用基因编辑技术来改变IAR20细胞系|大鼠肝细胞的行为，以更好地模拟体内环境并提高治疗效果。此外，IAR20细胞系|大鼠肝细胞还可以用于研究肿瘤微环境对肿瘤生长和转移的影响。

IAR20细胞系|大鼠肝细胞

IAR20细胞系|大鼠肝细胞培养操作

1)复苏IAR20细胞系|大鼠肝细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)IAR20细胞系|大鼠肝细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3)IAR20细胞系|大鼠肝细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

IAR20细胞系|大鼠肝细胞可以用于小鼠CD147糖基化位点突变体在小鼠肝细胞IAR20中的表达与生物学功能初步研究

基于本实验室已构建的野生型CD147真核表达载体,利用快速PCR定点突变的方法,构建CD147糖基化位点突变的真核表达载体,并将其稳定表达于IAR20细胞系|大鼠肝细胞中,观察CD147的糖基化对细胞的生物学功能的影响。

方法:1.利用快速PCR定点突变的方法,构建CD147糖基化位点突变pcDNA3.1表达载体。

2. 利用脂质体将野生型CD147及其糖基化位点突变体表达载体转染至小鼠肝正常细胞IAR20细胞上,以空表达载体做对照,经G418筛选及RT-PCR和Western blot分析,获得野生型CD147及其糖基化位点突变体稳定表达株。

3. 利用MTT法检测稳定表达野生型CD147及其糖基化位点突变体对IAR20细胞增殖能力的影响;利用体外基质侵袭实验,观察检测稳定表达野生型CD147及其糖基化位点突变体对IAR20细胞迁移和侵袭能力的影响。

结果:1、限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定表明,成功构建小鼠CD147糖基化位点突变真核表达载体pcDNA3.1/CD147(N154Q)和pcDNA3.1/CD147(N44,154Q)。

2、Western blot和RT-PCR结果表明,pcDNA3.1/CD147WT,pcDNA3.1/CD147N154Q和pcDNA3.1/CD147N44,190Q在小鼠肝正常细胞IAR20细胞中稳定表达野生型CD147和糖基化位点突变体CD147N154Q的分子量分别为44kDa和45kDa,糖基化位点突变体CD147N44,190Q表达为两条带,分子量分别为37kDa和42kDa。

3、与转染空载体和未转染细胞相比,稳定表达野生型CD147和糖基化位点突变体CD147N154Q的IAR20细胞增殖能力和迁移能力显著增强(p<0.05),而稳定表达糖基化位点突变体CD147(N44,190Q)对IAR20细胞的增殖能力和迁移能力没有显著影响(p>0.05)。

4、与转染空载体和未转染细胞相比,稳定表达野生型CD147、糖基化位点突变体CD147(N154Q)和CD147(N44,190Q)均不增加IAR20细胞侵袭能力。

结论:CD147的稳定表达促进IAR20细胞系|大鼠肝细胞的增殖和迁移,而CD147的这种促进作用与CD147糖基化程度有关。

参考文献

[1]Expression of CD147 on phorbol-12-myris-tate-13-acetate(PMA)-treated U937 cells differentiating into foam cells.H.H.Yue;;N.Leng;;Z.B.Wu;;H.M.Li;;X.Y.Li;;P.Zhu.Archives of Biochemistry and Biophysics,2009

[2]A novel antibody fragment targeting HAb18G/CD147 with cytotoxicity and decreased immunogenicity.Hongbin Zhu;;Bin Yang;;Xiangmin Yang;;Li Wang;;Jun Xu;;Chenggong Liao;;Qiang Feng;;Hao Tang;;Ling Hu;;Zhinan Chen;;Yu Li.Cancer Biology&Therapy,2009

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[4]Caveolin-1 up-regulates CD147 glycosylation and the invasive capability of murine hepatocarcinoma cell lines.Li Jia;;Shujing Wang;;Huimin Zhou;;Jun Cao;;Yichuan Hu;;Jianing Zhang.International Journal of Biochemistry and Cell Biology,2006

[5]金敏丽.小鼠CD147糖基化位点突变体在小鼠肝细胞IAR20中的表达与生物学功能初步研究[D].大连医科大学,2010.