INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞的应用

背景^[1-3]

INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞是一种大鼠胰岛素瘤细胞系，它是由一名患有胰岛素瘤的大鼠中分离出来的。这种细胞系在肿瘤学研究中具有重要价值，因为它可以用于评估新的治疗方法和药物的有效性，以及研究胰岛素瘤的发生和发展机制。

INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞通常被用于体外实验模型，例如细胞培养、基因转染、蛋白质表达等技术。研究人员可以通过改变培养条件、添加生长因子或使用基因编辑技术来改变INS-1E细胞系的行为，以更好地模拟体内环境并提高治疗效果。此外，INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞还可以用于研究肿瘤微环境对肿瘤生长和转移的影响。

INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞

INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞培养方法：

1、INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

应用^[4-5]

INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞可以用于IL-1β和IFNγ介导胰岛INS-1E细胞凋亡的机制

研究炎性因子IL-1β、IFNγ联合介导胰岛β细胞系INS-1E细胞产生凋亡的机制。

方法：1、收集临床Ⅱ型糖尿病人和正常人的血清并记录基本资料，用ELISA试剂盒分别检测糖尿病组和正常组血清中IL-1β和IFNγ的含量并进行组间比较；

2、将INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞分为对照组和凋亡组，对照组用正常培养基培养48小时，凋亡组用浓度为100U/ml IL-1β、1000U/ml IFNγ的炎性因子培养基刺激48小时。MTS检测两组细胞的活力并进行组间比较；光学显微镜观察两组细胞形态的变化；houchest33253对两组细胞的细胞核进行染色并用荧光显微镜观察两组细胞细胞核的变化；

3、免疫荧光染色法对两组细胞中Bax以及线粒体进行标识，并用荧光显微镜观察Bax在细胞中与线粒体位置关系的变化；Western blot检测两组细胞中蛋白质磷酸化水平、蛋白表达量的变化并进行组间比较；

4、将无意义质粒、TCTP过表达质粒、shRNA阻断质粒分别包被在腺病毒中侵染INS-1E细胞，侵染48小时后得到空载体组、TCTP过表达组、TCTP阻断组三组细胞，用荧光显微镜观察自带绿色荧光的质粒在三组细胞中的表达效率；Western blot检测三组细胞蛋白中TCTP表达量的变化；用浓度为100U/ml IL-1β、1000U/ml IFNγ的炎性因子培养基分别作用于三组细胞，作用时间为48小时，MTS检测三组细胞的活力，用TCTP过表达组和TCTP阻断组的细胞活力分别与空载体组的细胞活力进行比较。

结果：1、ELISA检测糖尿病组与正常组血清的IL-1β与IFNγ的含量：结果显示糖尿病组血清中IFNγ的浓度为0.29ng/L，与正常组（0.08ng/L）之间的差异有显著性意义（P<0.01）；糖尿病组IL-1β的浓度为0.38ng/L，与正常组（0.12ng/L）之间的差异也有显著性意义（P<0.01）。

2、MTS检测结果证实凋亡组细胞活力（0.28）与对照组（0.68）之间差异有显著性意义（P<0.01）；

3、光镜下凋亡组细胞形态发生皱缩而对照组细胞形态良好；荧光显微镜下houchest33258标识的凋亡组INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞核出现核浓缩、核碎裂等典型的凋亡形态改变，而对照组细胞核形态正常；对照组线粒体和Bax都均散在分布于细胞质中，而凋亡组中线粒体出现聚集同时Bax向线粒体迁移并与线粒体形成共定位；

4、Western blot检测凋亡组的细胞蛋白并与对照组进行比较发现凋亡组中TCTP的表达量降低，P53和cleaved caspase-3的表达量升高；凋亡组中Bcl-2家族内具有拮抗凋亡作用的Bcl-2、Bcl-xl和Mcl-1表达量降低；Bcl-2家族内具有促进凋亡作用的Bax和Bad蛋白表达量变化不明显；凋亡组中反映细胞增殖活力的激酶AKT活性降低；

5、荧光显微镜下三组细胞内的绿色荧光质粒均大量表达；过表达组TCTP水平升高，阻断组TCTP水平降低；MTS检测结果显示TCTP过表达组的细胞活力（0.49）与空载体组（0.35）之间差异有显著性意义（P<0.01），而TCTP阻断组（0.27）的细胞活力与空载体组（0.35）之间差异有显著性意义（P<0.05）。

参考文献

[1]Dietary dairy product intake and incident type 2 diabetes:a prospective study using dietary data from a 7-day food diary.Laura M.O’Connor;;Marleen A.H.Lentjes;;Robert N.Luben;;Kay-Tee Khaw;;Nicholas J.Wareham;;Nita G.Forouhi.Diabetologia,2014

[2]The emergence of targeted drugs in breast cancer to prevent resistance to endocrine treatment and chemotherapy.Eilin Austreid;;Per Eystein Lonning;;Hans Petter Eikesdal.Expert Opinion on Pharmacotherapy,2014

[3]Association of proinflammatory cytokines and islet resident leucocytes with islet dysfunction in type 2 diabetes.Matthew J.Butcher;;Daniel Hallinger;;Eden Garcia;;Yui Machida;;Swarup Chakrabarti;;Jerry Nadler;;Elena V.Galkina;;Yumi Imai.Diabetologia,2014

[4]Is type 1 diabetes a food-induced disease?.Mona Landin-Olsson;;Magnus Hillman;;Charlotte Erlanson-Albertsson.Medical Hypotheses,2013

[5]孔令超.IL-1β和IFNγ介导胰岛INS-1E细胞凋亡的机制[D].南昌大学,2015.