SW954人阴户鳞癌贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

SW954人阴户鳞癌贴壁细胞系是一种人类阴户鳞状细胞癌的细胞系，它是由一名患有阴户鳞状细胞癌的患者中分离出来的。这种细胞系在肿瘤学研究中具有重要价值，因为它可以用于评估新的治疗方法和药物的有效性，以及研究阴户鳞状细胞癌的发生和发展机制。

SW954人阴户鳞癌贴壁细胞系通常被用于体外实验模型，例如细胞培养、基因转染、蛋白质表达等技术。研究人员可以通过改变培养条件、添加生长因子或使用基因编辑技术来改变SW954人阴户鳞癌贴壁细胞系的行为，以更好地模拟体内环境并提高治疗效果。此外，SW954人阴户鳞癌贴壁细胞系还可以用于研究肿瘤微环境对肿瘤生长和转移的影响。

SW954人阴户鳞癌贴壁细胞系

SW954人阴户鳞癌贴壁细胞系培养方法：

1、SW954人阴户鳞癌贴壁细胞系传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、SW954人阴户鳞癌贴壁细胞系细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、SW954人阴户鳞癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

应用^[4-5]

SW954人阴户鳞癌贴壁细胞系可以用于PCBP1-AS1通过TRAF5介导的NF-κB信号通路调控外阴鳞癌细胞生物学行为的机制研究

探究PCBP1-AS1在外阴鳞状细胞癌中的表达情况,验证PCBP1-AS1可以通过TRAF5介导的NF-κB信号通路,调控外阴鳞癌细胞的生物学行为。

研究方法:采用实时定量聚合酶链反应法(Quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)检测19对外阴鳞状细胞癌组织和相应的癌旁正常外阴组织中PCBP1-AS1和TRAF5 mRNA的表达水平,采用Fisher精确检验进行PCBP1-AS1和TRAF5 mRNA的相对表达水平与外阴鳞状细胞癌患者临床病理资料的关系分析;采用蛋白印迹法(Western blot,WB)检测19对外阴鳞状细胞癌组织和相应的癌旁正常外阴组织中TRAF5、p65、p-p65、c-Rel和IκBα蛋白的表达水平。

通过脂质体转染方法成功地在SW954人阴户鳞癌贴壁细胞系中外源性改变PCBP1-AS1和TRAF5的表达后,采用qRT-PCR法检测PCBP1-AS1和TRAF5 mRNA的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖情况,Annexin V-FITC&PI法检测细胞凋亡情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,初步验证PCBP1-AS1和TRAF5在SW954人阴户鳞癌贴壁细胞系中的作用形式和生物学功能。

外源性改变PCBP1-AS1和TRAF5的表达后,WB法检测TRAF5、p65、p-p65、c-Rel和IκBα蛋白的表达水平,NF-κB激活—核转运荧光标记法检测细胞中NF-κB的活性变化;在SW954细胞中成功改变PCBP1-AS1和TRAF5表达的基础上,分别应用NF-κB信号通路激活剂和抑制剂,进行NF-κB激活—核转运荧光标记法、CCK-8、Annexin V-FITC&PI、划痕实验、Transwell侵袭小室等实验,探究PCBP1-AS1是否通过TRAF5介导的NF-κB信号通路对外阴鳞癌SW954细胞生物学行为进行调控。

结果:1、VSCC组织中PCBP1-AS1和TRAF5 mRNA的表达水平均低于相应的癌旁正常外阴组织;

2、VSCC组织中PCBP1-AS1的表达水平与患者的肿瘤大小、分化程度、FIGO分期、淋巴结转移、远处转移和鳞状细胞癌相关抗原密切相关,TRAF5 mRNA的表达与患者FIGO分期和淋巴结转移密切相关;

3、VSCC组织中TRAF5、p65、p-p65、c-Rel和IκBα蛋白的表达水平均明显低于其相应的癌旁正常外阴组织。

1、应用shRNA技术成功在SW954细胞中敲低TRAF5的表达,选取沉默效率较高的TRAF5-RNAi-0/SW954细胞用于后续实验;

2、PCBP1-AS1的表达上调后TRAF5 mRNA的表达水平随之上调;而TRAF5的表达上调或下调后PCBP1-AS1的表达水平均无明显变化;

3、PCBP1-AS1的表达上调能够显著抑制SW954细胞增殖,而TRAF5的表达下调能够显著促进SW954细胞增殖;

4、PCBP1-AS1的表达上调能够显著促进SW954细胞凋亡,而TRAF5的表达下调能够显著抑制SW954细胞凋亡;

5、PCBP1-AS1的表达上调能够显著抑制SW954细胞迁移,而TRAF5的表达下调能够显著促进SW954细胞迁移;6、PCBP1-AS1的表达上调能够显著抑制SW954细胞侵袭,而TRAF5的表达下调能够显著促进SW954细胞侵袭。

1、PCBP1-AS1的表达上调后TRAF5、p65、p-p65、c-Rel和IκBα蛋白的表达水平均随之明显上调;而TRAF5的表达下调后p65、p-p65、c-Rel和IκBα蛋白的表达水平均随之明显下调;

2、PCBP1-AS1的表达上调能够显著升高NF-κB的活性,而TRAF5的表达下调能够显著降低NF-κB的活性;

3、应用NF-κB信号通路激活剂后NF-κB的活性显著升高,而应用NF-κB信号通路抑制剂后NF-κB的活性显著降低,验证了NF-κB信号通路的激活和抑制模型的构建成功。

参考文献

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[2]Identification and evaluation of lncRNA and mRNA integrative modules in human peripheral blood mononuclear cells.Xing-Bo Mo;;Long-Fei Wu;;Xiao-Wei Zhu;;Wei Xia;;Lan Wang;;Pei He;;Peng-Fei Bing;;Xin Lu;;Yong-Hong Zhang;;Fei-Yan Deng;;Shu-Feng Lei.Epigenomics,2017

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[5]王洪雨.PCBP1-AS1通过TRAF5介导的NF-κB信号通路调控外阴鳞癌细胞生物学行为的机制研究[D].中国医科大学,2019.