SK-MEL-2人恶性黑色素瘤贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

SK-MEL-2人恶性黑色素瘤贴壁细胞系是人恶性黑色素瘤贴壁细胞系。它是一种肿瘤细胞，通常在体外培养用于研究黑色素瘤等肿瘤相关的生物学和病理学问题。

黑色素瘤是一种皮肤癌，通常与紫外线照射、遗传因素和其他环境因素有关。SK-MEL-2细胞系被广泛用于研究黑色素瘤的生物学特性、药物筛选和治疗等方面的研究。

在培养SK-MEL-2人恶性黑色素瘤贴壁细胞系时，通常需要在无菌条件下进行操作，并使用适当的细胞培养基和添加剂来维持细胞的生长和存活。细胞培养环境需要维持适当的温度、湿度和气体环境，以保证细胞的正常生长和分裂。

SK-MEL-2人恶性黑色素瘤贴壁细胞系

SK-MEL-2人恶性黑色素瘤贴壁细胞系培养操作

1)复苏SK-MEL-2人恶性黑色素瘤贴壁细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)SK-MEL-2人恶性黑色素瘤贴壁细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3)SK-MEL-2人恶性黑色素瘤贴壁细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

SK-MEL-2人恶性黑色素瘤贴壁细胞系可以用于HSulf-1在黑素瘤中的表达及抑制肿瘤细胞迁移的作用

观察人原代黑素细胞株HEMa和恶性黑素瘤细胞株A375、Malme-3M、SK-MEL-2人恶性黑色素瘤贴壁细胞系、SK-MEL-5、SK-MEL-28、M14、MV3中HSulf-1的表达及其意义。

方法：以人原代黑素细胞株HEMa作为对照,应用Real-time PCR和Western blot方法检测人恶性黑素瘤细胞系中HSulf-1蛋白和mRNA的表达。结果：在HSulf-1mRNA和蛋白表达水平上,正常黑色素细胞株、低转移性恶性黑素瘤细胞株高于转移性恶性黑素瘤细胞株。结论：HSulf-1在转移性黑素瘤的发生发展过程中可能发挥了抑制转移作用。

在黑素瘤细胞株中过表达HSulf-1目的：为了研究HSulf-1在黑素瘤发生发展过程中所起的作用,在黑素瘤细胞株中过表达:HSulf-1。

方法：将HSulf-1基因稳定表达载体pcDNA3.1/Myc-His(-)-HSulf-1质粒用脂质体转染法导入HSulf-1低表达的黑素瘤细胞MV3,用Western blot方法检测转染后人恶性黑素瘤细胞株MV3中HSulf-1在蛋白水平表达的改变,Real-time PCR方法检测人恶性黑素瘤细胞株MV3中HSulf-1在mRNA水平HSulf-1表达的改变。

结果：同对照相比,转染HSulf-1基因稳定表达载体的黑素瘤细胞株在HSulf-1蛋白、mRNA水平升高。

结论：黑素瘤细胞株成功过表达HSulf-1。

HSulf-1对恶性黑素瘤细胞生物学特性的影响目的：研究HSulf-1在黑素瘤发生发展过程中对肿瘤细胞增殖及迁移能力的影响。

方法：在HSulf-1过表达的黑素瘤细胞株,用Western blot方法检测HSulf-1在恶性黑色素瘤发生发展过程中对肿瘤细胞HGF信号通路的作用；用MTT法检测各组细胞生长与增殖能力的差异；用细胞迁移实验检测各组细胞迁移能力的差异。

结果：在HSulf-1稳定表达的恶性黑素瘤细胞株MV3中,ERK的磷酸化激活效应减弱,但可能不是由HGF信号通路介导；过表达HSulf-1的恶性黑素瘤细胞株MV3的迁移能力低于对照组；且在该细胞株中,HSulf-1对细胞的增殖能力的影响与对照组相比无明显差异。

结论：推测HSulf-1可能参与降低恶性黑素瘤细胞株的迁移能力,从而抑制肿瘤的转移。

参考文献

[1]Cancer statistics for Hispanics/Latinos,2012.Rebecca Siegel;;Deepa Naishadham;;Ahmedin Jemal.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2012

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[5]王育珏.HSulf-1在黑素瘤中的表达及抑制肿瘤细胞迁移的作用[D].华中科技大学,2015.