念珠菌通用PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

念珠菌通用PCR试剂盒是一款用于念珠菌检测的试剂盒，它基于PCR技术，可以对念珠菌的特定基因进行扩增，从而实现对念珠菌的快速、准确检测。

念珠菌通用PCR试剂盒包含了PCR反应所需的所有成分，包括引物、dNTPs、Taq酶等，只需要加入模板DNA即可进行反应。通过PCR扩增后，产物可以通过琼脂糖凝胶电泳进行检测，通过观察电泳条带的灰度值，可以判断念珠菌的相对表达量。

念珠菌通用PCR试剂盒具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，可以用于临床诊断、流行病学调查、食品检测等多个领域。在使用该试剂盒时，需要按照说明书的要求进行操作，保证实验结果的准确性和可靠性。

念珠菌通用PCR试剂盒

念珠菌通用PCR试剂盒是一种用于检测念珠菌（Candida）的PCR试剂盒。它包含以下主要成分：

1.引物：针对念珠菌特异性基因设计的引物，用于扩增目标DNA序列。

2.模板DNA：含有念珠菌基因组的DNA片段，用于PCR反应。

3.Taq DNA聚合酶：热稳定的DNA聚合酶，如Qiagen的PfuTurbo或Thermo Fisher Scientific的High-Fidelity PCR Master Mix，用于在PCR过程中催化DNA复制。

4.dNTPs：dATP、dTTP、dGTP和dCTP，用于提供PCR反应所需的原料。

PCR缓冲液：含有Mg2+、Ca2+等离子体成分的溶液，用于调节PCR反应的环境条件。

5.染料：如SYBR Green I或SYBR Gold，用于实时监测PCR反应过程中的产物扩增情况。

应用^[4][5]

念珠菌通用PCR试剂盒可以用于Multiplex PCR-RLB检测常见性病病原体的实验研究

建立和评价一个新的多重PCR-反向线点杂交技术(mPCR/RLB)检测常见性传播疾病(STD)病原体的方法。

方法:1.利用http://www.angis.org.au网站,在NCBI的GenBank数据库中获得试验菌株沙眼衣原体(CT)隐蔽质粒基因、淋病奈瑟菌(NG)的16S rRNA和Opa基因、3种支原体(人型支原体(Mh),解脲脲原体(Uu),微小脲原体(Up))的16S-23S rDNA间隔序列和6种念珠菌(白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、都柏林念珠菌)的5.8S-28S rDNA间隔序列的核苷核酸序列。分别设计CT和NG的特异性引物及检测探针。并用Pretty将6种念珠菌以及3种支原体的间隔序列分别进行比对,设计其相应属通用引物和各菌种的特异性寡核苷酸探针,使各引物及探针的Tm值等参数尽量一致。

2. 建立PCR/RLB检测6种常见念珠菌,对其进行方法学评价(包括特异性、敏感性等),并与涂片法、培养法鉴定结果(Merieux Vitek)进行比较。

3.建立mPCR/RLB同时检测CT、NG、Uu、Up和Mh等5种性病病原菌,并与荧光定量PCR(FQ-PCR)和支原体液体培养法进行比较。

结果:1.PCR/RLB检测上述6种念珠菌的敏感性为10 CFU/ml。通过对100株念珠菌分离株的检测,与培养法(Merieux Vitek)比较表明,有97株与培养法鉴定结果一致,另外3株通过DNA测序证实与PCR/RLB检测结果一致。通过对200例女性阴道试子标本进行检测,PCR/RLB的阳性率为49%,而涂片法和培养法的阳性率分别为27%和39%,明显高于涂片法和培养法(P<0.05)。

3. mPCR可同时扩增CT、NG、Uu、Up和Mh标准菌株DNA,其PCR产物的片段长度为208bp～414bp。97份FQ-PCR CT阳性标本中有93份经mPCR/RLB检测为CT阳性,45份FQ-PCR CT阴性标本中35份mPCR/RLB阴性。41份FQ-PCR NG阳性标本中34份mPCR/RLB NG阳性,101份FQ-PCR NG阴性标本中98份mPCR-RLB阴性。其中36份经mPCR/RLB检测为两重以上混合感染。32份支原体液体培养阳性标本中28份mPCR/RLB阳性,13份支原体培养阴性标本经mPCR/RLB检测均为阴性。

结论:成功建立了Multiplex PCR/RLB快速、同时检测常见性传播疾病病原体的新方法,为其临床应用奠定了基础。

参考文献

[1]Molecular Beacons as Diagnostic Tools:Technology and Applications.Klara Abravaya;;Jeffrey Huff;;Ron Marshall;;Barbara Merchant;;Carolyn Mullen;;George Schneider;;John Robinson.Clinical Chemistry and Laboratory Medicine,2003

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[4]Utilization of the internal transcribed spacer regions as molecular targets to detect and identify human fungal pathogens.P.C.Iwen;;S.H.Hinrichs;;M.E.Rupp.Medical Mycology,2002

[5]向华国.Multiplex PCR-RLB检测常见性病病原体的实验研究[D].重庆医科大学,2008.