小鼠单克隆抗体制备

背景^[1-7]

小鼠单克隆抗体制备是由激活的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合而成的单克隆杂交瘤细胞产生的。小鼠单克隆抗体是最常见最经典的单克隆抗体。同时小鼠也是生物学和医学领域中最常见的模式动物之一。小鼠单克隆抗体优点;高度特异性、高度均一性、可快速、大量、连续生产、应用领域广泛，涵盖检测治疗等多个领域、制备方案和工具成熟、应用前景良好。

杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的免疫动物脾细胞（如小鼠B淋巴细胞）和具有永生功能的肿瘤细胞（如小鼠骨髓瘤细胞）。被特异性抗原免疫的免疫动物脾细胞（B淋巴细胞）的主要特征是它的抗体能够分泌产生结合抗原特定位置（表位）的抗体，但其自身不能在体外连续培养，具有永生功能的肿瘤细胞（骨髓瘤细胞）则可在培养条件下无限分裂、增殖，即具有所谓永生性。

在选择培养基的作用下，只有由一个B淋巴细胞与一个骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞才能具有持续培养的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。理论上，我们认为一个免疫后的B淋巴细胞只分泌产生一种抗体，而一个杂交瘤细胞只包含一个B淋巴细胞，所以增值后的杂交瘤细胞均来自一各克隆，因此产生的抗体就是单克隆抗体。

服务内容：

1、抗原准备

2、免疫Bal B/C小鼠

3、小鼠抗血清检测（ELISA、IHC、IF、WB）

4、血清检测结果合格，进行细胞融合及阳性细胞株的筛选，亚克隆，建立稳定分泌抗体的细胞株，细胞株保存

5、制备小鼠腹水，抗体纯化

6、细胞株分泌抗体亚型鉴定

抗原要求：

1.蛋白抗原：蛋白量>5mg，浓度＞1mg/ml，纯度>85%，分子量>10KDa

2.多肽抗原：多肽量>5mg，纯度>95%

应用^[8]

1、诊断各类病原体

这是单抗应用最多的领域，已有大量诊断试剂商品供选择。如用于诊断乙肝病毒、丙肝病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、EB病毒和各种微生物、寄生虫感染的试剂等。单抗所具有的灵敏度高、特异性好的特点，使其在鉴别菌种的型及亚型、病毒变异株，以及寄生虫不同生活周期的抗原性等方面更具独特优势。

2、肿瘤特异性抗原和肿瘤相关抗原的检测

用于肿瘤的诊断、分型及定位。尽管目前尚未制备出肿瘤特异性抗原的单抗，但对肿瘤相关抗原(如甲胎蛋白、肿瘤碱性蛋白和癌胚抗原)的单抗早就用于临床检验。随着淋巴细胞杂交瘤技术的应用，许多抗人肿瘤标记物的杂交瘤细胞株已经建立，这为肿瘤的早期诊断及其阐明肿瘤的发生、发展，了解肿瘤细胞的生物学活性及其定量研究奠定了基础。

用抗肿瘤单抗检查病理标本，可协助确定转移肿瘤的原发部位。以放射性核素标记单抗可用于体内诊断，再结合X-线断层扫描技术，可对肿瘤的大小及其转移灶作出定量诊断。

3、检测淋巴细胞表面标志

用于区分细胞亚群和细胞的分化阶段。例如检测CD系列标志，有利于了解细胞的分化和T细胞亚群的数量和质量变化，这对多种疾病诊断具有参考意义。细胞表面抗原的检测，将对白血病患者的疾病分期、治疗效果、预后判断等方面有指导作用。组织相容性抗原检测是移植免疫学的重要内容，应用单抗对其进行位点检测可得到更可信的结果。

4、机体微量成分的测定

应用单抗结合其它技术，可对机体的多种微量成分进行测定。如放射免疫分析，即是利用了同位素的灵敏性和抗原-抗体反应的特异性而建立起来的方法，它可以测至10-9～10-12g，使原来难以测定的激素能够进行定量分析。除了激素，还可检测诸多酶类、维生素、药物和其它生化物质。这对受检者健康状态判断、疾病检出、指导诊断和临床治疗均具有实际意义。

参考文献

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