人膀胱癌细胞的应用

背景^[1-3]

人膀胱癌细胞是一种来自一名68岁男性白人的膀胱癌组织，常用于泌尿系统疾病的发病机理研究。这种细胞在显微镜下呈上皮细胞样，能生成SCF、IL-1、IL-3、IL-6、G-CSF、GM-CSF等细胞因子。该细胞经STR鉴定结果无误，且支原体检测阴性。

人膀胱癌细胞

人膀胱癌细胞培养步骤：

1）复苏人膀胱癌细胞细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）人膀胱癌细胞细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。

方法三：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。

1）人膀胱癌细胞细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。

应用^[4-5]

人膀胱癌细胞可以用于莲心碱抑制膀胱癌细胞5637增殖并下调CDK-2的表达

通过莲心碱(Liensinine)对人膀胱癌细胞5637细胞的作用,研究莲心碱对膀胱癌细胞5637增殖及细胞周期的影响,初步探讨莲心碱对人膀胱癌细胞5637细胞周期影响的作用机制。

方法:用浓度分别为(1.562、3.125、6.250、12.500、25.000μg/mL)的莲心碱溶液,处理人膀胱癌细胞5637细胞,使用CCK-8法及克隆形成实验,测定莲心碱对人膀胱癌细胞5637细胞增殖的影响;通过流式细胞术PI染色法,检测莲心碱对人膀胱癌细胞5637细胞周期的影响;采用Western blot技术分析莲心碱对细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2表达的影响。

结果:(1)CCK-8法检测结果表明:随药物浓度的增加及孵育时间的延长,莲心碱各加药组相对于对照组表现出明显的增殖抑制作用。莲心碱作用48 h后,人膀胱癌细胞5637细胞增殖抑制率分别为(7.18±0.05)%、(12.15±0.04)%、(19.21±0.01)%、(23.96±0.05)%、(30.45±0.03)%,差异有统计学意义(p<0.05)。

(2)克隆形成实验结果表明:莲心碱对膀胱癌细胞5637的增殖有明显的抑制作用,莲心碱作用于人膀胱癌细胞5637细胞7 d后,克隆抑制率分别为(40.07±0.02)%、(55.66±0.05)%、(72.00±0.01)%、(85.59±0.01)%、(93.1±0.01)%,差异有统计学意义(F=184.1,P<0.01)。

(3)流式细胞术检测细胞周期的结果提示:5637细胞在1.5625、3.125、6.25、12.5μg/mL的莲心碱干预后,其G1期细胞群明显增加,占有比例为(55.03±0.81)%、(56.97±0.69)%、(57.87±0.27)%、(58±0.78)%,实验结果具有统计学意义(F值:79.98,p<0.0001)。同时,我们还发现在25μg/mL的莲心碱干预后,其S期细胞群也显著增加,占有比例为(41.51±0.62)%,结果具有统计学意义(F值:143.1,p<0.0001)。

(4)Western blot相关检测结果显示:莲心碱组与对照组相比,CDK-2表达水平呈下调的趋势。

结论:莲心碱可抑制膀胱癌5637细胞增殖,其作用机制可能与促进CDK2表达下调有关。

参考文献

[1]Management of Non–Muscle-Invasive(Superficial)Bladder Cancer.Vinod H.Nargund;;C.K.Tanabalan;;M.N.Kabir.Seminars in Oncology,2012

[2]Inhibition of autophagy and induction of breast cancer cell death by mefloquine,an antimalarial agent..Cancer Letters,2012

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[4]Current therapeutic strategies for invasive and metastatic bladder cancer.Winston Tan;;Winston Tan;;Mathew.OncoTargets and Therapy,2011

[5]孔祥辉.莲心碱抑制膀胱癌细胞5637增殖并下调CDK-2的表达[D].桂林医学院,2017.