SDS-PAGE超低分子量标准品的应用

背景^[1-3]

SDS-PAGE超低分子量标准品是用来测定SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量，该品由三种多肽和两种低分子量蛋白质组成。

SDS-PAGE超低分子量标准品（Super low range protein MW marker）是一种在分子生物学和蛋白质研究中常用的标准参照物。它通常用于SDS-PAGE电泳实验中，作为蛋白质分子量范围的标准，便于研究者对未知蛋白质的分子量进行估算或确认。

SDS-PAGE超低分子量标准品通常会包含一系列已知分子量的蛋白质，这些蛋白质在SDS-PAGE电泳中会根据其分子量的大小表现出不同的迁移率，从而形成一条条清晰的条带。研究者可以通过将这些条带与未知蛋白质的条带进行比较，从而大致推算出未知蛋白质的分子量。

SDS-PAGE超低分子量标准品

SDS-PAGE超低分子量标准品在分子生物学和蛋白质研究领域中常常被使用，并且通常保存在-20℃的环境下。需要注意的是，这种标准品在开封后应当立即使用，因为它含有多种蛋白质，长期暴露在空气中可能会引起污染。SDS-PAGE是一种蛋白质电泳技术，其英文全称为Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis。它结合了SDS（十二烷基硫酸钠）和聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点，能够分离和鉴定不同分子量大小的蛋白质。

在SDS-PAGE中，由于SDS是一种阴离子去污剂，可以破坏蛋白质的氢键和疏水相互作用，导致蛋白质构象改变，使其带负电。在电泳过程中，由于SDS的存在，蛋白质分子的大小和形状成为影响其迁移率的主要因素，因此该技术主要依据蛋白质的分子量大小来进行分离。

SDS-PAGE具有高分辨率和灵敏度，能够检测出低至1ng的蛋白质。此外，由于SDS-PAGE具有广泛的适应性和可重复性，它已经成为蛋白质研究中最常用的方法之一。

应用^[4-5]

SDS-PAGE超低分子量标准品可以用于用SDS-PAGE和密度扫描定量检测小麦单籽粒高、低分子量麦谷蛋白亚基

检测了高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)和低分子量麦谷蛋白亚基(LMW-GS)的提取量随温度条件和提取时间的变化情况。在高温(90和65℃)时,HMW-GS和LMW-GS的提取量都很快达到(分别为5min和30min),延长提取时间只能使提取量降低。

在较低的温度条件(-20、4、0、15、18、23、35或50℃)时,提取量的变化复杂:在18h内,HMW-GS提取量随提取时间的延长而增加,并且温度越高提取量越多,但是当提取时间达到7天时,提取量在-20℃,依次为0℃和4℃,而在18、23、35和50%时,HMW-GS提取量降得如此之多以致于不能用Coomassie Brilliant Blue R250检测到它们。与HMW-GS相似,27h内在较低温时LMW-GS的提取量随时间的增加而增多,但不随温度的增加(从-20到35℃)而增多(它们的提取量相似),较低温度提取条件都优于高温(90和65℃)提取条件。

当提取时间为7天时23℃是LMW-GS的的提取温度。多次把样品移入-70℃也有利于HMW-GS和LMW-GS的提取。

根据以上谷蛋白亚基提取特征,本研究设计了从小麦(Triticum aeativum L.)全麦粉中一次性同时完全提取MW-GS和LMW-GS方法,这个方法综合利用了90、23和70℃的温度条件和48h的较长时间。

优化了通过SDS-PAGE分离HMW和LMW麦谷蛋白亚基的过程,同时也优化了提取单体蛋白的温度条件和提取时间(以取得的谷蛋白亚基的提取量和纯度)。

研究用一种单体蛋白作为定量标准来定量亚基(单位μg)。这种方法比其他单独定量HMW-GS或LMW-GS的方法有一些重要优势。首先,能够得到HMW-GS和/或LMW-GS相对于全部谷蛋白或全麦粉的相对含量。其次,能够得到凝胶上样品和小麦单籽粒中单个HMW或LMW亚基的绝对含量,并且这种数值可以按高低排序。

用以上方法,检测了180个小麦品种的各个麦谷蛋白亚基的质量。根据亚基分子量的范围,计算得到A区、B区、C区和D区亚基的质量和,初步分析了其分布和变异。5mg面粉的总亚基质量和,A区亚基质量和,B区亚基质量和,C区亚基质量和及D区亚基质量和的变化范围分别为21.79～352.36μg,4.12～85.01μg,5.91～102.52μg,4.82～113.75μg和8.86～135.51μg,变异系数分别为:35.07%、39.32%、37.02%、39.83%和42.66%。

参考文献

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