小鼠淋巴管内皮细胞的应用

背景^[1-3]

小鼠淋巴管内皮细胞是研究淋巴系统和淋巴管内皮细胞功能的重要工具之一。这些细胞可以在体外进行培养，并且有一些特定的特征和生长条件。

小鼠淋巴管内皮细胞的细胞形态可能包括铺路石状细胞和不规则细胞。这些细胞在生长过程中会贴壁生长，并需要特定的培养条件，例如气相和温度等。一般来说，这些细胞会在37℃下进行培养，并且需要定期进行传代和冻存。

在进行小鼠淋巴管内皮细胞的培养时，需要注意一些细节。例如，这些细胞需要使用完全培养基进行培养，并且需要添加一定浓度的DMSO进行冻存。此外，这些细胞需要进行QC检测，以确保其纯度和安全性。一般来说，这些细胞的QC检测项目包括鉴定vEGFR-3荧光染色和支原体、细菌、酵母和真菌等微生物的检测。

小鼠淋巴管内皮细胞

小鼠淋巴管内皮细胞复苏操作：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存小鼠淋巴管内皮细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将小鼠淋巴管内皮细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

应用^[4-5]

小鼠淋巴管内皮细胞可以用于淋巴管内皮细胞通过NIK调节B细胞淋巴结归巢及SAPHO综合征外周血γδT细胞相关研究

淋巴细胞归巢过程的分子基础是淋巴细胞与各组织、器官血管内皮细胞粘附分子的相互作用。其中,B细胞归巢到淋巴结的过程需要通过高内皮小静脉在趋化因子(尤其是CXCL13)的指导下完成。然而,CXCL13并不是由高内皮小静脉直接产生,其如何介导B细胞归巢到淋巴结的分子机制目前还未阐明。NF-κB信号通路参与免疫反应、炎症反应、细胞凋亡、肿瘤发生等多种生物进程。NIK作为非经典NF-κB途径的关键分子也在维持完整的淋巴系统功能,特别是在维持完整的淋巴结和B细胞群,发挥重要作用。但对于其在淋巴管内皮细胞中的作用仍不甚明了,本研究旨在探索淋巴管内皮细胞中的NIK分子对于淋巴管功能的影响及其分子机制。

方法:本研究将NIK-flox小鼠与Lyvel EGFP-hCre小鼠交配繁育出淋巴管内皮细胞条件性敲除NIK的小鼠(NIKLEC-KO,NIKfl/flLyvel+/Cre)及同窝对照的野生型(NIK+/+Lyvel+/Cre)小鼠。

首先通过流式细胞术对小鼠的免疫器官进行表型分析,并通过耳部淋巴回流功能检测和异硫氰酸荧光素着色实验,评价NIKLEC-KO小鼠淋巴管引流液体和运输树突状细胞的功能。然后利用体内归巢实验检测主要细胞亚群的归巢情况。

通过RT-qPCR分析相关趋化因子的表达,最后免疫小鼠通过酶联免疫吸附试验检测小鼠的抗体分泌能力以评价其体液免疫功能。

结果:在本研究中,发现介导非经典NF-κB途径活化的激酶NIK对淋巴管内皮细胞介导的B细胞归巢到淋巴结发挥了重要作用。淋巴管内皮细胞条件性敲除NIK的小鼠并未表现出淋巴管的完整性破坏或整体功能的异常,但却表现出淋巴结中的B细胞比例显著降低。而在该小鼠脾脏中并未出现B细胞比例及生存状态的异常。B细胞的过继转移实验发现淋巴管内皮细胞特异性敲除NIK使淋巴结招募B细胞的功能发生障碍。此外,本研究进一步发现NIK介导淋巴管内皮细胞CXCL13和CCL19的表达。

结论:NIK是通过调节淋巴管内皮细胞产生B细胞归巢趋化因子CXCL13进而使初始B细胞归巢到淋巴结。

参考文献

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