人鳞状细胞癌的应用

背景^[1-3]

人鳞状细胞癌是一种恶性皮肤肿瘤，其特征是鳞状细胞发生恶性转化并形成肿瘤。SCC-15是其中一种具有特定生物学特性的细胞系，可以从患者身上获得并用于研究目的。

人鳞状细胞癌SCC-15细胞系具有一些与其他鳞状细胞癌细胞系相似的生物学特性，如细胞角蛋白表达、细胞间连接和细胞增殖等。这些细胞系通常用于研究鳞状细胞癌的发生、发展和治疗等，以及评估新药和治疗方案的疗效和安全性。

需要注意的是，人鳞状细胞癌SCC-15细胞系是一种肿瘤细胞系，具有高度异质性，不同的细胞系可能会表现出不同的生物学特性。因此，在研究中应该注意选用符合要求且规范的SCC-15细胞系，并在使用前对其生物学特性进行评估和确认。

人鳞状细胞癌

人鳞状细胞癌培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．人鳞状细胞癌处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

注：次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

人鳞状细胞癌冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例；

1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

人鳞状细胞癌可以用于松油烯-4-醇通过线粒体途径诱导人鳞状细胞癌细胞凋亡的机制研究

探讨松油烯-4-醇(Terpinen-4-ol,T40)对人宫颈鳞状细胞癌Siha细胞凋亡的影响及其可能的机制。

方法:采用含有胎牛血清(10%)的DMEM高糖培养基培养宫颈鳞状细胞癌Siha细胞。并将其分为对照组(0.1%DMSO,不加松油烯-4-醇)和三个实验组,实验组分别加入浓度为5μmol/L、7.5μmol/L、10μmol/L的T40进行处理。并以10μmol/L顺铂作为阳性对照组。用CCK-8法检测不同浓度T40对Siha细胞增殖能力的影响;Annexin V-FITC/PI法检测Siha细胞凋亡率;TUNEL荧光染色法检测Siha细胞凋亡数;JC-1检测Siha细胞线粒体膜电位的变化;Western blot检测Siha细胞内Bax、Bcl-2、Cytochrome c、Caspase9、Cleaved-Caspase9蛋白表达量;RT-PCR法检测Siha细胞内Bax、Bcl-2、Cytochrome c、Caspase9、HPVE6、HPVE7m RNA表达量。

结果:T40(0、5μmol/L、7.5μmol/L、10μmol/L)处理Siha细胞24小时后,细胞增殖能力明显减弱,且随T40浓度增大细胞凋亡率升高(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞内Bax、Cytochrome c、Cleaved-Caspase9的蛋白表达量增加(P<0.05),Bcl-2的蛋白表达量降低(P<0.05)。细胞内Bax、Cytochrome c、Caspase9m RNA表达量增加(P<0.05),HPVE6/E7m RNA表达量降低(P<0.05)。

结论:T40能抑制Siha细胞体外增殖、诱导其凋亡,作用机制可能与通过线粒体途径调控细胞内Bax、Bcl-2、Cytochrome c、Cleaved-Caspase9的蛋白表达量及降低HPVE6、HPVE7m RNA表达量有关.

参考文献

[1]Prognostic and Clinical Value of Interleukin 6 and CD45+CD14+Inflammatory Cells with PD-L1+/PD-L2+Expression in Patients with Different Manifestation of Ovarian Cancer.Wertel Iwona;Suszczyk Dorota;Pawłowska Anna;Bilska Monika;Chudzik Agata;Skiba Wiktoria;Paduch Roman;Kotarski Jan.Journal of Immunology Research,2020

[2]Natural products for treating colorectal cancer:A mechanistic review.Xuan-mei Huang;;Zhi-jie Yang;;Qing Xie;;Zi-kang Zhang;;Hua Zhang;;Jun-ying Ma.Biomedicine&Pharmacotherapy,2019

[3]BAX is an essential key mediator of AP5M1-induced apoptosis in cervical carcinoma cells..Won Miae;Luo Yongyang;Lee DongHo;Shin Eunkyoung;Suh DaeShik;Kim TaeHyoung;Jin Hanyong;Bae Jeehyeon.Biochemical and biophysical research communications,2019

[4]Cisplatin:The first metal based anticancer drug.Sumit Ghosh.Bioorganic Chemistry,2019

[5]袁乡石.松油烯-4-醇通过线粒体途径诱导人鳞状细胞癌细胞凋亡的机制研究[D].贵州医科大学,2023.