豚鼠单克隆抗体制备服务

背景^[1-7]

豚鼠单克隆抗体制备服务可以为客户提供豚鼠杂交瘤制备服务。通过将豚鼠脾脏B细胞与我们独特的骨髓瘤细胞融合，可以生产稳定性和产率都非常高的豚鼠杂交瘤细胞。豚鼠(Cavia porcellus)是与豚鼠密切相关的一个物种驯化的后裔，这种啮齿类动物在野外环境中不是天然存在的。属于应用于生命科学研究领域最早的物种之一，目前已有200多年的历史。

在20世纪，因为豚鼠的基因学研究开始落后于大鼠和小鼠，使它在科学研究中的应用性逐渐落后于二者。但是豚鼠仍然是一种在过敏反应和过敏研究中非常理想的抗体来源物种，也是在多种感染性疾病（如：肺结核和白喉）研究中非常重要的模式动物。

随着豚鼠基因组测序的发展，豚鼠似乎逐渐恢复了它在单克隆抗体生产领域中的吸引力。豚鼠是更加敏感的啮齿类动物，它的免疫球蛋白基因与小鼠相比更加接近人类。同时，豚鼠的遗传学距离鼠类较远，这使得它对一些在小鼠、大鼠、兔和人类中高度保守的蛋白或者那些被鼠类识别为自身抗原的蛋白的免疫反应更强烈。

另外，一些小分子抗原，如抗生素和毒素，它们不能引起小鼠、大鼠或者人的免疫反应，此时豚鼠是除兔子和绵羊之外的另一可选择物种。利用豚鼠生产高亲和力的单克隆抗体的一个典型例子就是抗人胰岛素单克隆抗体的生产。因为大鼠、小鼠胰岛素与人类胰岛素同源性较高，很难获得小鼠和大鼠的单克隆抗体。以上特点使豚鼠在一系列研究和疾病治疗中生产针对一些新型靶点的特异性抗体拥有巨大的潜力。

杂交瘤技术的基本原理：

细胞融合是一个随机的物理过程。在小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞混合细胞悬中，经融合后细胞将以多种形式出现，如融合的脾细胞和瘤细胞、融合的脾细胞和脾细胞、融合的瘤细胞和瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体形式等。正常的脾细胞在培养基中存活仅5～7天，无需特别筛选，细胞的多聚体形式也容易死去。

而未融合的瘤细胞则需进行特别的筛选去除。在细胞融合后，要从上述五种细胞中筛选出杂交瘤细胞，一般使用HAT培养进行筛选，HAT培养基中含有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶(T)三种成分。细胞的DNA合成有内源性途径(主要途径)和外源性途径(旁路途径)两种方式。

内源性途径就是利用谷氨酰胺或单磷酸尿苷酸在二氢叶酸还原酶的催化下来合成DNA；而外源性途径则是利用次黄嘌呤或胸腺嘧啶在次嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase,HGPRT)或胸腺嘧啶激酶(thymidine kinase,TK)的催化下来补救合成DNA，HAT培养基中氯基喋呤是二氢叶酸还原酶的抑制剂,能有效地阻断DNA合成的内源性途径。

B淋巴细胞具有HGPRTTK这两种酶,因此在内源性途径被阻断后仍能利用HAT培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶来合成DNA，可在HAT培养基中存活,但B淋巴细胞是正常细胞,故不能长期存活。杂交瘤技术中所使用和SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞为HGPRT-的TK-缺陷型,缺乏HGPRT酶和TK酶在内源性途径被阻断后不能进行DNA的外源性合成，故不能在HAT培养基中存活。

杂交瘤细胞由于继承了B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的双重特性，能够合成HGPRT酶和TK酶，故在HAT养基中能长期存活。因此将融合后的混合细胞在HAT培养基中培养两周后，只有杂交瘤细胞能存活下来，成为制造单克隆抗体的细胞源。

应用^[8]

用于豚鼠模式动物相关疾病的检测:

例如在豚鼠气单胞菌单克隆抗体及抗独特型单克隆抗体的制备研究的实验中需要制备并鉴定抗豚鼠气单胞菌的单克隆抗体(mAb)，为豚鼠气单胞菌病的检测及防治提供新的技术方法，并为其它鱼用疫苗的研制提供参考。

参考文献

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