猴（NHP）单克隆抗体制备服务

背景^[1-6]

猴（NHP）单克隆抗体制备服务是利用噬菌体展示抗体库构建和筛选技术分离到了大量的针对不同靶点的NHP单克隆抗体。与啮齿类动物相比，猴属于大型动物且具有和人类相近的遗传背景，使其成为基础和应用研究中非常关键的非人灵长类（NHP）模型动物。猴（NHP）单克隆抗体制备服务不但可以为客户解决了抗体研发中的难题，同时也可以为客户的治疗用途提供了大量有价值的抗体，并且开辟了抗体生产的新途径。

噬菌体展示技术流程：

1.ScFv基因库的获得：收集目标抗体宿主的免疫细胞，提取细胞总RNA；反转录后，使用多对引物分别扩增抗体基因VH和VL，纯化回收VH和VL片段后，使用Linker引物将全套VH和VL基因随机拼接成ScFv基因库；

2. ScFv基因库转化大肠杆菌：将全套 ScFv 基因片段连接至pCANTAB5e载体，随后电转化大肠杆菌TG1；同时鉴定ScFv基因库库容（及基因的插入率）；

3.噬菌体ScFv抗体库的构建：将辅助噬菌体M13K07加入到转入了ScFv抗体基因的，生长至对数生长期的大肠杆菌中进行噬菌粒拯救；培养过夜后，离心收集上清即获得噬菌体ScFv抗体库；

4.抗体库的滴度测定：取少量上述获得的噬菌体ScFv抗体库，梯度稀释后进行噬斑培养实验，观察噬斑生长情况以判断噬菌体ScFv抗体库的滴度；

5. 噬菌体抗体库的富集筛选：使用靶标抗原包被酶联板，加入噬菌体抗体进行孵育，随后进行洗板、洗脱；将洗脱下来的噬菌体抗体进行中和后，再次感染细菌，并进行第二轮的淘洗；共进行3轮淘洗，每一轮洗脱后都进行滴度测定；最后一轮筛选时，设BSA包被的对照组以确定是否富集了大量抗BSA的噬菌体抗体。

噬菌体展示抗体库构建流程：

1. 免疫细胞收集，总RNA提取，反转录合成cDNA。

2. 以以上cDNA为模板,PCR扩增抗体基因片段，并连接至载体(例如：pComb3或pCANTAB5e载体)。

3. 将已构建好的载体电转化至大肠杆菌菌株。

4. (1)以上转化菌株复苏后，梯度稀释，并涂布平板，计算阳性克隆数；(2)挑选10个阳性单克隆，提取质粒后，进行酶切验证;(3)通过阳性克隆数和酶切验证的结果，计算抗体库库容。

5. 通过辅助噬菌粒拯救获得噬菌体展示抗体库。

应用^[7][8]

1.用于猴单克隆抗体的相关研究

例如在利用单细胞PCR从免疫后中国猕猴筛选H7N9高亲和力中和抗体的实验中需要用ELISA法检测抗原抗体亲和力。而H7N9高亲和力猴单克隆抗体的制备就需要用猴（NHP）单克隆抗体制备服务来缩短抗体的制备时间。

2.用于猴单克隆抗体的相关研究Western Blot试剂盒的生产

参考文献

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